ГОСТ 28085-2013
8.2.3 Пробирки и флаконы с посевами на всех средах, кроме среды Сабуро, выдерживают в
термостате при температуре (37
±
1)°С. на среде Сабуро - при температуре (22.5
±
2.5) °С, в течение 7
сут (для анаэробных препаратов - 14 сут).
8.2.4 По истечении указанного срока делают пересев, за исключением посевов на МПА.
Пересевают пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные
посевы выдерживают 7 сут (для анаэробных препаратов - 14 сут).
8.3 Проведение испытания на контаминацию микоплазмами
8.3.1 Для определения контаминации микоплазмами лекарственных средств проводят их
посев на выбранные питательные среды (7.5.9 - 7.5.11) в количестве 10 см3лекарственного средства
на 100 см3каждой жидкой среды, а также по 0.2 см3на четыре чашки Петри с аналогичной твердой
питательной средой.
Посевы инкубируют при температуре (37
±
1) °С в аэробных и микроаэрофильных условиях (в
атмосфере азота, содержащего 5 % - 10 % диоксида углерода). Жидкие питательные среды
инкубируют в течение 20 - 21 дня. Твердые питательные среды инкубируют в течение не менее 14
дней, за исключением посевов, соответствующих 20 - 21-дневному пересеву, которые инкубируют
в течение семи дней. Одновременно в тех же условиях инкубируют по одному флакону, содержащему
100 см3, и по две чашки Петри со средами для контроля их стерильности.
На 2-й - 4-й день после посева проводят пересев материала от каждой жидкой среды в
количестве не менее 0,2 см3на две чашки Петри каждой твердой среды. Пересевы повторяют на 7-й, 14-
й и 20-й дни испытания. Пересевы инкубируют при температуре (37
±
1) °С в аэробных и
микроаэрофильных условиях (в атмосфере азота, содержащего 5 % - 10 % диоксида углерода) в
течение 21 дня.
8.3.2 Состояние жидких сред контролируют каждые два или три дня и. в случае изменения
окраски среды, выполняют пересев. Если в жидких средах обнаруживают рост бактерий и грибов,
испытание считают недействительным и повторяют.
8.3.3 Допускается для целей экспресс-метода - выявления микоплазм и/или подтверждения
принадлежности выделенных культур к микоплазмам - использование метода полимеразной цепной
реакции с применением соответствующих тест-систем. Работу проводят по инструкции производителя.
9 Проведение испытания настерильность методом мембранной фильтрации
9.1 При определении стерильности лекарственных средств, обладающих выраженным
антимикробным действием, а также в расфасовке более чем 100 см3, можно использовать метод
мембранной фильтрации.
9.2 Испытание проводят с использованием фильтрационной установки, которую монтируют
таким образом, чтобы исследуемую пробу жидкого препарата можно было ввести и профильтровать в
условиях асептики. Используют мембранные фильтры с размером пор (0.45
±
0,02) мкм и внешним
диаметром 47 мм с установленной способностью к удерживанию микроорганизмов. Материал
фильтров - нитрат целлюлозы или ацетат целлюлозы.
9.3 Отбирают необходимое для испытания количество исследуемой пробы согласно таблице 2
и асептически переносят на один или несколько фильтров.
При использовании замкнутой системы, емкости заполняют равным объемом сред. При этом
следует избегать аэрации тиогликолевой среды.
Испытания проводят под вакуумом при давлении 93.3 кПа и скорости прохождения жидкости
55 - 75 см3в мин.
9.4 После окончания фильтрации мембрану промывают тремя - пятью порциями стерильного
0.9 %-ного раствора хлорида натрия или дистиллированной воды, после чего мембрану асептически
извлекают, разрезают стерильными ножницами пополам.Одну половину помещают в колбу,
содержащую 100 см3 тиогликолевой среды, а вторую - в колбу со 100см3 среды Сабуро.
Тиогликолевую среду с помещенными в них фильтрами выдерживают при температуре (32.5
±
2.5) °С,
а среду Сабуро при температуре (22.5
±
2,5) °С в течение 7 сут при ежедневном просмотре.
10 Учет и оценка результатов
10.1 Учет результатов проводят после окончания периода инкубации.
10.1.1
Л
екарственные средства, содержащие инактивированные микроорганизмы и грибы,
считают стерильными, если в посевах на питательные среды отсутствует рост бактерий, грибов и
микоплазм.
10