ГОСТ 28085-2013
7.4 Общие требования, предъявляемые к приготовлению и хранению питательных сред
7.4.1 Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления, а также
испытанию микробиологических критериев качества, ростовых и селективных свойств питательных
сред - по ГОСТ ISO 11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.
7.4.2 Готовить питательные среды следует строго придерживаясь приведенной рецептуры, а
сухие питательные среды - согласно инструкции по применению организации-производителя.
Необходимый pH питательных сред устанавливают при температуре (25
±
2)°С. Среды стерилизуют в
автоклаве в течение 15 мин при температуре 121 °С, если нет других указаний в нормативном
документе на конкретное лекарственное средство.
7.4.3 После стерилизации не менее 5 % пробирок или чашек от каждой партии питательной
среды помещают в термостат и инкубируют в течение 14 сут, параллельно с посевом на стерильность.
7.5 Приготовление питательных сред
7.5.1 Приготовление смеси витаминов
Для приготовления смеси витаминов берут 100 мг биотина. 100 мг пантотената кальция, 100
мг хлорида холина, 100 мг фолиевой кислоты. 200 мг i-Инозита, 100 мг никотинамида. 100 мг
гидрохлорида пиридоксина. 10 мг рибофлавина, 100 мг гидрохлорида тиамина, смешивают в
стерильных условиях и доводят объем раствора стерильной дистиллированной водой до 1000
см’. Готовую смесь стерилизуют автоклавированием в течение 10 - 15 мин при 110 °С. Используется
как компонент при приготовлении среды Фрея.
Срок хранения смеси витаминов в защищенном от света месте при комнатной температуре -
не более 1 мес.
7.5.2 Приготовление бульона экстракта говяжьего сердца
Для приготовления бульона экстракта говяжьего сердца смешивают 500 г говяжьего сердца.
10 г ферментативного пептона. 5 г хлорида натрия, доводят объем раствора дистиллированной водой
до 1000 см3, стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 “Си
фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Используется как компонент для приготовления среды
Хейфлика.
7.5.3 Приготовление сбалансированного солевого раствора Хэнкса (модифицированного)
Для приготовления сбалансированного модифицированного солевого раствора Хэнкса берут
6.4 г хлорида натрия. 0,32 г хлорида калия, 0.08 г сульфата магния. 0.08 г хлорида магния. 0.112 г
безводного хлорида кальция. 0.0596 г гидрофосфат дигидрата натрия, 0.0048 г безводного
дигидрофосфата калия и доводят объем раствора дистиллированной водой до 800 см3.
Стерилизуют методом мембранной фильтрации, изложенным в разделе 9.
Используется как компонент для приготовления среды Фриса.
7.5.4 Приготовление бульона из экстракта сердца и мозгов
Для приготовления бульона из экстракта сердца и мозгов берут 200 г экстракта мозга теленка.
250 г экстракта говяжьего сердца, 10 г ферментативного пептона, 2 г моногидрата глюкозы. 5 г
хлорида натрия. 2.5 г безводного гидрофосфата натрия и доводят объем раствора дистиллированной
водой до 1000 см3. Стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и
фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
Используется для приготовления среды Фриса.
7.5.5 Приготовление бульона PPLO
Для приготовления бульона PPLO берут 50 г экстракта говяжьего сердца, 10 г
ферментативного пептона. 5 г хлорида натрия и доводят объем раствора дистиллированной водой до
1000 см3. Стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и фильтруют через
ватно-марлевый фильтр.
Используется для приготовления среды Фриса.
7.5.6 Приготовление жидкой тиогликолевой среды
Для приготовления жидкой тиогликолевой среды берут 0.50 - 0.75 г/.-цистеина, 0.75 г
гранулированного агара массовой долей влаги не более 15 %. 2.5 г хлорида натрия. 5,0 г моногидрата
глюкозы. 5.0 г водорастворимого дрожжевого экстракта. 15,0 г панкреатического гидролизата казеина,
тиогликолевой кислоты, 0.3 см3 или тиогликолята натрия, 0.5 - 0.75 см3, доводят объем раствора
дистиллированной водой до 1000 см3 и нагревают до полного растворения. Затем добавляют 1.0
см3 свежеприготовленного раствора резазурина натрия (1 :1000), перемешивают и разливают в
пробирки соответствующего объема. Среду автоклавируют при температуре 121 °С в течение 15 мин.
pH среды после стерилизации (7.0
±
0,2).
7.5.7 Приготовление жидкой соево-казеиновой среды
Для приготовления жидкой соево-казеиновой среды берут 17.0 г панкреатического
гидролизата казеина. 3.0 г гидролизата соевой муки, 5.0 г хлорида натрия, 2.5 г хлорида калия, 2,5 г
калия фосфата двузамещенного. 2.5 г глюкозы, доводят объем раствора дистиллированной водой до
6