ГОСТРИСО 20743—2012
Инкубацию осуществляют в следующих условиях:
- температура: (37
±
2) °С;
- степень встряхивания: 110 мин’1с амплитудой 3 см;
- время инкубации: (3
±
1) ч.
Целью выращивания является получение количества КОЕ, равного 107 КОЕ/мл или концентрации
АТФ, равной 10-7 моль/л после инкубации.
П р и м е ч а н и е — Подготовленный материал для посева хранят на льду для охлаждения и используют
в течение 8 ч.
10.3.1.4 Приготовление посевного материала для испытаний
Используя метод абсорбции, приготавливают бактериальную взвесь, содержащую от 1-107
до ЗЮ 7 КОЕ/мл. или методом люминесценции достигают концентрации АТФ. равной от МО 7
до З Ю ’7 моль/л. используя 20-кратиые разведения питательного бульона (см. 6.5) при комнатной
температуре.
П р и м е ч а н и е — Приготовленный материал для посева хранят на льду для охлаждения и используют
в течение 4 ч.
10.3.2 Предварительная обработка образцов для испытаний
10.3.2.1 Подготовка образцов для испытаний
Берут шесть образцов контрольного полотна и шесть образцов с антибактериальной обработкой
и с каждого образца вырезают куски площадью 60 мм2.
Если необходимо, то испытуемые образцы стирают по методу, изложенному в ИСО 6330. илидруго
му соответствующему способу, и затем образцы ополаскивают водой для удаления моющих средств. Ис
пользование других неспецифичных методов обработки должно быть отражено в протоколе испытаний.
П р и м е ч а н и е — Три контрольных образца и три образца с антибактериальной обработкой используют
для подсчета числа бактерий сразу же после отпечатывания бактерий для испытаний. Оставшиеся образцы ис
пользуют для подсчета числа бактерий после инкубации.
10.3.2.2 Стерилизация образцов для испытаний
Образцы помещают в чашки Петри (см. 5.17). которые накрывают алюминиевой фольгой, и сте
рилизуют в автоклаве при температуре 121 °С и давлении 103 кПа в течение 15—20 мин. После стери
лизации фольгу удаляют и размещают образцы на чистом лабораторном столе (см. 5.6) или в другом
месте, исключающем риск контаминации образца воздухом, и сушат в течение 60 мин и более.
Если автоклавирование невозможно, то стерилизацию проводят газом этиленоксидом. гамма-лу
чами или другим подходящим методом. При этом использование альтернативных методов должно быть
отражено в протоколе испытаний.
10.3.2.3 Регуляция влажности образцов для испытаний
10 мл агара наливают в чашку Петри (см. 5.17) для получения отпечатков (см. 6.12). Открытую чаш
ку кладут на чистый лабораторный стол (см. 5.6) для охлаждения и затвердевания. Охлаждают до ком
натной температуры, предотвращая образование конденсата. Когда агар затвердеет, переворачивают
чашку вверх дном. Образец помещают внутри чашки и регулируют влажностьобразца в течение 18—24
ч.
10.3.3 Проведение испытания
10.3.3.1 Фильтрация бактерий
В фильтровальный аппарат, стерилизованный автоклавированием, помещают мембранный
фильтр и устанавливают на лабораторном столе (см. 5.6).
Наливают 5 мл питательного бульона (см. 6.5). разведенного предварительно 20 раз. на мембран
ный фильтр и добавляют 2 мл посевного материала для испытаний, приготовленного в соответствии
с 10.3.1.4. Проводят фильтрацию методом аспирации. Аспирацию (отсасывание) продолжают еще при
мерно в течение 1 мин. после того как исчезнет жидкость с мембранного фильтра.
П р и м е ч а н и е
1—
Стерилизацию мембранного фильтра не проводят в связи с тем. что после его сте
рилизации изменяют размеры пор.
П р и м е ч а н и е 2 — Шлаковое стекло или покрытую тефлоном сетку располагают под мембранным филь
тром при использовании фильтровального аппарата. Для отсасывания используют маленький воздушный насос.
10.3.3.2 Отпечатывание тестовых бактерий
17