ГОСТРИСО 20743—2012
Для получения ночной культуры из рабочего раствора, хранящегося при температуре минус 20 °С,
вносят пипеткой 50—100 мкл стерильного 80%-ного глицерина в в 5 мл питательной среды.
7.2.4 Идентификация штамма
Для идентификации штамма проводят проверку в соответствии с общепринятыми методами
идентификации.
Для каждого бактериального штамма предусматривается запись следующей информации:
a) наименование национальной коллекции культур, из которой были получены лиофилизирован-
ные штаммы;
b
) таксономическое наименование по классификации и соответствующий номер лиофилизиро-
ванного штамма;
c) номер партии лиофилизированного штамма, полученной из национальной коллекции культур;
d) дата выращивания лиофилизированного штамма;
e) дата приготовления культуры для хранения;
f) лабораторный код сохраняющейся культуры.
Должна быть сделана запись об использованных методах, применяемых для проверки чистоты
и идентификации штамма, даты проведения и результаты таких проверок.
8 Количественные измерения
8.1 Чашечный метод подсчета числа колоний
8.1.1 Используя пипетку (см. 5.15). берут 1 мл суспензии и добавляют в пробирку, содержащую
(9,0
±
0.1) мл питательного бульона (см. 6.5) или пептонно-солевого раствора (см. 6.6). Смесь тщатель
но встряхивают.
8.1.2 Используя новую пипетку, переносят 1 мл полученного раствора в новую пробирку, содер
жащую (9.0
±
0.1) мл среды и вновь тщательно встряхивают. Последовательно повторяя процедуру,
выполняют серию разведений таким образом, чтобы общее число разведений составляло 10. По 1 мл
кахщого разведения переносят пипеткой в две чашки Петри.
8.1.3 На водяной бане (см. 5.3) подогревают примерно 15 мл агара для подсчета числа коло
ний (ЕА) (см. 6.11) до температуры от 45 °С до 46 °С и наливают в чашки Петри, тщательно переме
шивая. Чашки выдерживают при комнатной температуре до затвердевания агаровой среды, затем
их переворачивают и помещают в термостат при температуре (37
±
2) °С и проводят инкубацию
в течение 24—48 ч.
8.1.4 После инкубации подсчитывают число колоний на чашках Петри в тех разведениях, где можно
сосчитать от 30до 300 КОЕ. и вычисляют концентрацию бактерий в растворе по следующей формуле.
cs = ZR,
где св — концентрация бактерий в колониеобразующих единицах на миллилитр. КОЕ/мл;
2 — среднее число в колониеобразующих единицах КОЕ на двух чашках Петри:
R — степень разведения.
8.2 Метод люминесценции
8.2.1 Формула для калибровочной кривой
8.2.1.1 Берут стандартный препарат АТФ (см. 6.14). физиологический раствор (см. 6.7). сре
ду SCDLP (см. 6.8) либо другую подходящую среду и готовят три отдельных раствора, содержащие
до 2-10"8 моль/л, 2-10 9 моль/л и 2 Ю ~10 моль/л АТФ соответственно.
8.2.1.2 Наливают по 0,1 мл каждого раствора, приготовленных по 8.2.1.1. в три отдельные испыта
тельные пробирки. В каждую пробирку добавляют по 0.9 мл буферного раствора (см. 6.9) и тщательно
взбалтывают. Наливают по 0,1 мл каждого раствора отдельно в три испытательные пробирки и обозна
чают их как образцы для измерения разведенного стандартного реагента.
8.2.1.3 Наливают в пластиковую пробирку для испытаний 0.1 мл физиологического раствора
(см. 6.7). SCDLP(см. 6.8) илидругой подходящей среды, 0,8 мл буферного раствора (см. 6.9) и 0,1 мл АТФ
нейтрализующего агента (см. 6.18). Тщательно взбалтывают, а затем наливают по 0.1 мл в три отдельные
пробирки для испытаний. Выдерживают от 5до 30 мин и обозначают как образцы для измерения.
8.2.1.4 В испытательную пробирку, содержащую образец для измерения, добавляют 0.1 мл пор
ции АТФ экстрагирующего реагента (см.6.17) и встряхивают. Добавляют 0.1 мл АТФ люминесцирующего
8