ГОСТРИСО 20743—2012
реагента (см. 6.16), снова взбалтывают и. немедленно используя люминесцентный фотометр (см. 5.9),
определяют количество люминесценции.
8.2.1.5 Добавляют к образцам для измерения разведенного стандартного реагента 0,1 мл АТФ экс
трагирующего реагента (см. 6.16) по порядку, начиная с наименьшей концентрации, и встряхивают, а за
тем немедленно используют люминесцентный фотометр (см. 5.9), определяя количестволюминесценции.
8.2.1.6 Вычисляют концентрацию АТФ посредством среднего количества люминесценции, полу
ченной при измерении различных разведений стандартного реагента (2 Ю ’а моль/л. 2-10’9 моль/л
и 2 Ю ’10 моль/л). и учета этих значений как среднего значения коэффициента А.
8.2.1.7 Получают коэффициент В замещением коэффициента А. подставляя сАТФ = 0 в следую
щую формулу для калибровочной кривой:
с
а
т
ф
= АХ +В,
где сДТф — концентрация АТФ в моль на литр (моль/л);
X — количество люминесценции в относительных единицах света.
П р и м е ч а н и е — Коэффициент корреляции между сА7ф и X равен R2 £ 0.9 и доверительный интер
вал > 0,95.
8.2.2 Концентрация АТФ бактериальной суспензии
8.2.2.1 Готовят одну пробирку для нейтрализации АТФ и три испытательные пробирки для изме
рений.
8.2.2.2 Наливают 0.1 мл перемешанной бактериальной суспензии. 0.8 мл буферного раствора
для разведений (см. 6.9) и 0,1 мл АТФ нейтрализующего агента (см. 6.18) в испытательную пробирку, пред
назначенную для элиминации (устранения) АТФ. итщательно перемешивают. Наливают по0,1 мл раствора в
три испытательные пробирки, подготовленные для измерений, и выдерживают их от 5 до 30 мин.
8.2.2.3 Добавляют 0.1 мл реагента для экстракции АТФ (см. 6.17) в каждую из пробирок и тща
тельно взбалтывают. Добавляют 0.1 мл АТФ люминесцирующего агента (см. 6.16), повторно взбал
тывают и немедленно же используют люминесцентный фотометр (см. 5.9). определяя количество
люминесценции.
8.2.2.4 Вычисляют концентрацию АТФ сАТФпо формуле, приведенной в 8.2.1.7. а затем рассчиты
вают концентрацию АТФ в отмытой бактериальной суспензии в соответствии со следующей формулой:
с
а
т
ф
=сАТФ/1000,
где сАТФ — концентрация АТФ. моль/л, в перемешанной бактериальной суспензии.
9 Метод перемешивания
9.1 Перемешивание вихревым миксером
Дно испытательной пробирки прижимают к резиновой пластинедержателя вихревого миксера (см.
5.4) и перемешивают 5 раз по 5 с.
9.2 Перемешивание вручную
Берут испытательную пробирку или колбу в руку и встряхивают с амплитудой качания 30 см в те
чение 30 с.
9.3 Перемешивание в гомогенизаторе Стомахер
Помещают заранее подготовленный одноразовый пластиковый пакет (см. 5.22) в гомогенизатор
Стомахер (см. 5.5) и включают устройство на 1 мин для каждой из сторон пакета.
10 Процедуры испытаний
10.1 Метод абсорбции
10.1.1 Инкубация и приготовление посевного материала для испытаний
10.1.1.1 Инкубация А
9