ГОСТ Р 55291—2012
Для приготовления среды в мерной колбе вместимостью 1000 см3смешивают 35,0 г сухого пи
тательного агара. 2.5 г дрожжевого экстракта, 1,0 г D-глюкозы, доводят дистиллированной водой до
метки, устанавливают 7,0 ед. pH и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 20 мин.
Срок хранения готовой среды при температуре (4 ± 2) °С - не более двух недель.
8 Методы посева и культивирования
8.1 Метод посева на твердые питательные среды в чашках Петри - по ГОСТ Р 54065 и ГОСТ
ISO 7218.
8.2 Метод культивирования - по ГОСТ ISO 7218.
9 Основные методы идентификации микроорганизмов
О
9.1 Окрашивание по Граму проводят в соответствии с ГОСТ ISO 7218.
9.2 Проба на каталазу
Обнаружение каталазы, которая разлагает перекись водорода (Н
2 2
) на воду и кислород, про
водят, используя бульонную культуру или отдельную колонию на агаровой среде. Если в конкретных
стандартах на методы анализа не установлены другие требования, то во всех случаях питательная
среда не должна содержать кровь. Исключение составляет кровь, подвергшаяся термической обра
ботке (среда с вареной кровью). В случае анаэробных бактерий перед добавлением перекиси (перок
сида) водорода культуру выдерживают 30 с на открытом воздухе.
9.3 Проба на каталазу с колонией
На предметное стекло наносят отдельно две капли раствора перекиси (пероксида) водорода
массовой долей 3 %. Отделяют колонию от среды стерильным стеклом или пластиковой палочкой (но не
металлической иглой) и осторожно диспергируют ее в одной из капель. Немедленно, а также через
несколько минут (но не менее 1 мин) отмечают отсутствие или образование пузырьков кислорода. В
сомнительном случае покрывают обе капли предметным стеклом и сравнивают наличие пузырьков в
обеих каплях. Наблюдения проводят визуально или с помощью микроскопа при малом увеличении.
9.4 Проба на оксидазу
9.4.1 Обнаружение оксидазы проводят по окрашиванию компонентов вследствие окисления N.
N. N’. N’-тетраметил-пара-фенилендиамина дигидрохлорида под действием фермента.
9.4.2 Проведение анализа и интерпретация результатов
Увлажняют кусок фильтрованной бумаги раствором по 7.3.1. Отбирают пробу бактериальной
культуры с агаровой среды, на которой ее выращивали, с помощью платиновой иглы, стеклянной или
пластиковой палочки (никель-хромовая игла дает ошибочные положительные результаты). Пробу по
мещают на увлажненную фильтрованную бумагу.
В случае присутствия оксидазы через 5-10 с появляется окрашивание от фиолетового до пур
пурного цвета. Если после 10 с цвет не изменился, проба на оксидазу считается отрицательной.
9.5 Проба на лецитиназу
Наличие или отсутствие лецитиназиой активности определяют на желточно-солевом агаре
(ЖСА). Пробу бактериальной культуры с агаровой среды с помощью стерильной платиновой петли
пересевают на желточно-солевой агар. Культивируют при температуре (36 ± 1) °С в течение 24-48 ч.
На плотной питательной среде вокруг колоний, вырабатывающих активную лецитиназу. просматрива
ется широкая беловатая непрозрачная радужная зона.
9.6 Проба на коагулазу
9.6.1 Проба на коагулазу, используемая для идентификации патогенных стафилококков, осно
вывается на выявлении бактериального фермента коагулазы, который разрушает фибриноген и рас
творяет сгустки крови. Используют сухую кроличью плазму промышленного производства с цитратом
натрия или EDTA.
9.6.2 Проведение анализа и интерпретация результатов
9.6.2.1 Слайд-тест («хлольеобразующий фактор»)
На стекло наносят одну каплю кроличьей плазмы, суспензируют в ней бактериальные колонии стафи
лококков и наблюдают за реакцией втечение 10 с.
Альтернативный способ: на стекле готовят густую суспензию культуры в дистиллированной во
де, тщательно гомогенизируют, чтобы исключить спонтанное склеивание. Добавляют одну каплю
кроличьей плазмы и. дополнительно не перемешивая, наблюдают за образованием хлопьев в течение
Юс.
7