ГОСТ Р 55291—2012
1 г реактива переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят холодной дистиллиро
ванной водой до метки.
Реактив готовят непосредственно перед применением.
7.3.2 Приготовление раствора ТТХ массовой долей 10 г/дм3
1 г ТТХ переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до
метки и стерилизуют методом мембранной фильтрации.
Срок хранения раствора в темной плотно закрытой посуде при температуре (4 ± 2) °С - не более
3 мес.
7.4 Приготовление питательных сред
Приготовление питательных сред и их проверка перед использованием должны соответствовать
требованиям ГОСТ ISO 11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2.
Подготовка питательных сред перед использованием - по ГОСТ Р 54065.
7.4.1 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным
3.0 г мясного экстракта. 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы. 5.0 г хлористого натрия, 0.5 г фосфорно
кислого двузамещенного калия. 15,0 г агар-агара переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см1и
доводят до метки дистиллированной водой. Допускается использовать мясо-пептоиный бульон по
ГОСТ 20730. Смесь нагревают до полного растворения компонентов, охлаждают до температуры 45° С
- 55° С. устанавливают значение pH (7.2 ± 0.1) при температуре 25 сС. Среду стерилизуют в течение 20
мин при температуре (115 ± 1) °С. затем охлаждают до температуры 45 °С - 55 °С, и добавляют 40
см3 раствора фенолового красного и 2 см1 раствора бриллиантового зеленого, тщательно пере
мешивают и разливают в стерильные чашки Петри, колбы или флаконы.
7.4.2 Селективный агар по Сланецу и Бертли
20.0 г пептона, 25.0 см3 дрожжевого экстракта, 2,0 г D-глюкозы, 4.0 г калия фосфорнокислого
двузамещенного. (15.0 ± 3,0) г агар-агара помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доли
вают дистиллированной водой до метки, нагревают до полного растворения компонентов. Охлаждают и
устанавливают (7,2 ± 0,1) ед. pH. Стерилизуют текучим паром при температуре 100 "С в течение 30 мин,
охлаждают до температуры 50 °С. Добавляют из расчета на 100 см3 среды: азида натрия -0.04 г, 1 %-
ного водного раствора2-. 3-,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ) - 1 см3. Тщательно
смешивают, разливают в стерильные чашки Петри по 20 - 25 см3.
Срок хранения среды в холодильнике при температуре (4±2) °С - не более двух недель. Среду
допускается готовить перед употреблением без стерилизации в автоклаве.
7.4.3 Канамицин азидно-эскулиновый агар (КАЭ-агар)
20.0 г пептона из казеина, 25,0 см3дрожжевого экстракта, 5.0 г натрия хлорида. 1.0 г натрия ли
моннокислого, 0.5 г железа (Ш)-аммония щдроцитрата. 1.0 г эскулина, (15.0 ± 3,0) г агара помещают в
мерную колбу вместимостью 1000 см3, доливают дистиллированной водой до метки. Растворяют со
ставные части при нагревании до температуры (55 ± 1) °С. затем охлаждают до температуры 25 °С и
устанавливают значение pH таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло (7,1 ± 0,1) ед.
pH. Стерилизуют при температуре (121 ± 1) вС в течение 15 мин, охлаждают до температуры 50 °С.
добавляют 1,5 см3раствора азида натрия и 0.4 см3 раствора канамицин сульфата массовой концен
трации 50 г/дм3или 0.2
c
m
j
раствора канамицин сульфата массовой концентрации 100 г/дм3и разли
вают по чашкам Петри.
Срок хранения среды при температуре (4 ± 2) °С - не более 7 сут.
7.4.4 Щелочная полимиксиновая среда
Основа среды: к 400 см3мясо-пептонного бульона по ГОСТ 20730 добавляют 5 г натрия хлори
да, 10 г D-глюкозы, 10 см3дрожжевого экстракта. Основу среды стерилизуют при температуре (110 ±
1) °С в течение 12 мин, охлаждают и добавляют 250 см3 раствора натрия карбоната массовой кон
центрации 21,2 г/дм3и 250 см3раствора бикарбоната натрия массовой концентрации 10 г/дм3. Уста
навливают значение pH при температуре 25 5С таким образом, чтобы оно составило (10.1 ± 0,1) ед.
pH. После этого к среде добавляют 200 000 ЕД полимиксина М сульфата или полимиксина В сульфа
та, 5.0 см3спиртового раствора бромтимолового синего.
Срок хранения среды в защищенном от света и высыхания месте при температуре (4 ± 2) °С -
не более 7 сут.
Непосредственно перед использованием среду разливают по 5 см3 в стерильные пробирки.
Растворы полимиксин В сульфата или полимиксин М сульфата готовят непосредственно перед ис
пользованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком по ГОСТ 10444.2 вносят 5 или 10
см3стерильной дистиллированной воды.
7.4.5 Молочно-ингибиторная среда (МИС)
К 850 см3 расплавленного и охлажденного до температуры 50 °С мясо-пептонного агара, приго
товленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 150 см3 обезжиренного молока . приготовленного по ГОСТ
10444.1, 12,5 см3раствора кристаллического фиолетового. 10.0 см3раствора калия теллурита массо-
5