ГОСТ ISO 21527-1—2013
По причине быстрого осаждения спор в пипетке (6.2) ее следует держать в горизонтальном (не вер
тикальном!) положении при заполнении соответствующим объемом исходной суспензии и разведений.
Встряхивают исходную суспензию и разведения для избежания осаждения частиц, содержащих
микроорганизмы.
9.2 Инокуляция и инкубация
9.2.1 На одну агаровую пластинку с DRBC (5.2.1) переносят с помощью стерильной пипетки (6.2)
0.1 см3испытательного образца, если это жидкость, или 0,1 см3исходной суспензии — в случае других
продуктов (раздел 8).
На вторую агаровую пластинку с DRBC переносят с помощью новой стерильной пипетки 0.1 см3
первого десятикратного (1(H) разведения (жидкий продукт) или 0.1 см3 разведения 1<Н (другие продук
ты).
Для облегчения подсчета низких популяций дрожжевых и плесневых грибов объемы вплоть до
0.3 см3разведения 10’ ’ пробы или испытательного образца в случае жидкости можно нанести на три
пластинки.
Эти операции повторяют с последующими разведениями, используя новую стерильную пипетку
для каждого десятикратного разведения.
П р и м е ч а н и е — Если предполагается присутствие быстрорастущих плесневых грибов, следует исполь
зовать ISO 21527-2 (6).
9.2.2 Жидкость распределяют по поверхности агаровой пластинки стерильным шпателем (6.8)до
тех пор. пока она не будет полностью абсорбирована в среду.
Для инокуляции пластинок можно также использовать наливной метод, но в этом случае эквива
лентность результатов должна быть валидирована при сравнении с поверхностной инокуляцией, и раз
личение. и дифференцирование плесневых и дрожжевых грибов не приемлемы. Метод нанесения на
поверхность может дать более высокие результаты подсчета. Поверхностный метод обеспечивает мак
симальное воздействие атмосферного кислорода на клетки и предотвращает риск тепловой инактива
ции грибных пропагул. Результаты могут зависеть от типа грибов.
9.2.3 Приготовленные пластинки (9.2.2) инкубируют аэробно, с крышками наверху, в прямом поло
жении в инкубаторе (6.1) при (25 ± 1) “С в течение пяти дней. При необходимости агаровые пластинки
выдерживают на рассеянном свете от одного до двух дней.
Рекомендуется инкубировать чашки (6.6) в открытом пластмассовом пакете во избежание загряз
нения инкубатора в случае разрастания плесневых грибов из чашек.
9.3 Подсчет и отбор колоний для подтверждения
Считывают пластинки в промежутке отдвух до пяти дней инкубации. Отбирают чашки (9.2.3), со
держащие меньше 150 колонийУпропагул/ зародышей, и подсчитывают эти колонии/пропагулыУзаро-
дыши. Если возникают трудности из-за быстрорастущих плесневых грибов, подсчитывают коло-
нии/пропагулы/зародыши через два дня и снова через пять дней инкубации.
П р и м е ч а н и я
1 Методы подсчета дрожжевых и особенно плесневых грибов не являются точными, потому что они состоят
из смеси мицелия и спор бесполого и полового размножения. Количества колониеобразующих единиц зависят от
степени фрагментации мицелий и соотношения спор, способных расти на питательной среде.
2 Часто имеет место нелинейность подсчетов при инокуляции с использованием разведений, т. е. 10-крат
ные разведения часто не дают 10-кратного уменьшения количества колоний, полученных на питательной среде.
Это относят за счет фрагментации мицелия и разрыва скоплений спор во время разведения помимо конкурентного
ингибирования, когда на ппастинах вырастает большое число колоний.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Споры плесневых грибов рассеиваются в воздухе с большой легкос
тью, поэтому при работе с чашками Петри следуетсоблюдать осторожность во избежание разви
тия сателлитных колоний, которые могут дать завышенную оценку популяции в образце.
При необходимости проводят исследование с помощью бинокулярной лупы (6.9) или микроскопа
(6.7) для различения колоний дрожжевых или плесневых грибов и колоний бактерий.
Подсчитывают колонии дрожжевых грибов и колонии/пропагулы плесневых грибов по отдельнос
ти, если необходимо.
Для идентификации дрожжевых и плесневых грибов отделяют области грибного роста и удаляют
для высокоэффективного микроскопического анализа, или инокулируют на подходящую разделитель
ную или идентификационную среду.
6