ГОСТ 31748— 2012
6
М
е
тод
и
к
а
и
с
пы
та
ния
6.1 Общие замечания
Растворы проб и стандартные растворы для определения с помощью ВЭЖХ должны содержать
одинаковый растворитель или смесь растворителей.
6.2 Экстракция
Взвешивают 25 г гомогенизированной пробы, с точностью 0,1 г в сосуде блендера (см. 5.2). Добав
ляют 5 г хлорида натрия (см. 4.2) и 125 см3растворителя для экстракции (см. 4.10) и гомогенизируют с
помощью перемешивающего устройства в течение 2 мин при высокой скорости. Контролируют, чтобы
время и скорость перемешивания не оказывали негативного влияния на эффективность экстракции.
Смесь фильтруютчерезрифленую фильтровальную бумагу (см. 5.3) (V,).
Отбираютпипеткой 15
см3(V2)
фильтрата в коническуюколбуподходящегоразмера состеклянной
пробкой. Добавляют 30
см
3 воды, закрывают колбу пробкой и перемешивают. Перед проведением
аффинной колоночной хроматографии разбавленный экстракт фильтруют через фильтровальную
бумагу изстеклянного микроволокна (5.4). Фильтрат
{V3)
должен быть прозрачным. Если это нетак. про
водят повторную фильтрацию. Незамедлительно следуют процедурам в соответствии с 6.3.
Для получения прозрачного раствора можно также использовать центрифугу.
6.3 Очистка
Готовят IА колонку (см. 5.1)иосуществляютпроцедуруочистки всоответствии синструкциями про
изводителя. Отбирают пипеткой 15 см3(V4) второго фильтрата (V3)в емкостьдля растворителя IAколон
ки. Пропускают его через разделяющую колонку, затем промывают колонку, как это описано в
инструкциях производителя и удаляют элюаты. Начинают проводить элюирование афлатоксинов.
Собираютэтанольный или ацетонитрильныйэлюат(в зависимостиот продуктаили инструкцийпроизво
дителя) в мерной колбевместимостью 2см3(см. 5.5)(илидругого объема, установленного производите
лем). Разбавляютдо метки водой (V5). Перемешивают и действуют в соответствии с 6.4.
Методы ввода в IA колонки, промыванияиэлюирования немного отличаются взависимости от про
изводителя колонки, и необходимочеткоследоватьконкретным инструкциям, прилагаемымкколонкам.
П р и м е ч а н и е — В целом, процедуры включают экстракцию образца смесью метанола и воды, фильтра
цию или центрифугирование, возможное разбавление образца раствором фосфатного буфера или водой, загрузку
под давлением в предварительно промытую колонку, промывку колонки дистиллированной водой и элюирование
афлатоксинов метанолом или ацетонитрилом (в зависимости от продукта и инструкций производителя).
Допускается использовать традиционные колонки с силикагелем или колонки твердофазной
экстракции. В этих случаях также необходимо четко следовать инструкциям производителя. Если
растворитель, применяемыйдля элюирования афлатоксинов. несовместим сподвижнойфазой,тоэлю
ат необходимо выпаритьдо сухого остатка в токе азота при температуре ниже 40 °С. Остатокнеобходи мо
растворить в подвижной фазе и разбавить до 2
смг
или до того объема, который установлен
производителем.
Необходимо предусмотреть, чтобы максимальная емкость колонки не была превышена.
6.4 Условия работы при выполнении ВЭЖХ
Выход разделительной колонки подсоединяют кодномуответвлению тройника системы послеко-
лоночной дериватизации (5.9.4) с помощью короткого фрагмента системы труб с внутренним диамет
ром. например, 0.25 мм. Ко второму ответвлению тройника подсоединяют выход насоса, который
поставляет реагент для послеколоночнойдериватизации. Один конец витка труб из политетрафторэти
лена илинержавеющей стали (см. 5.9.4) присоединяютктретьемуответвлению тройникаи другой конец
присоединяют кдетектору (см. 5.10). Используя термостат или водяную баню, поддерживают темпера
туру реакционного змеевика на уровне 70 °С.
В случае использования колонки, указанной в 5.9.3. подходящими являются следующие пара
метры:
- скорость потока подвижной фазы (колонка): 1.0 см3/’мин;
- скорость потока лослеколоночного реагента: 0,3 см^мин;
- впрыскиваемый объем: 50 мкл.
Дают всей системе функционировать 10— 20 мин для ее стабилизации. Если используется интег
ратор. настраиваютрегулировкучувствительности флуоресцентногодетектора илиинтегратора, чтобы
получить соответствующий сигнал: шум 5:1 для 0.125 нг афлатоксина G2в 50 мкл. Если используется
5