ГОСТ 31748— 2012
3
С
ущн
ость м
е
тода
Анализируемый образец экстрагируют смесью метанола и воды. Экстракт образца фильтруют,
разбавляютводой и вводят вколонку для аффинной хроматографии, содержащую антитела, специфич
ные для афлатоксинов В,. В2, G, и G2.Афлатоксины выделяют, очищают и концентрируют на колонке,
после чего отделяют от антител при помощи метанола. Афлатоксины определяют количественно при
помощи высокоэффективнойжидкостной хроматографии (ВЭЖХ)собращенной фазойсопределением
флуоресценции ипослеколоночной дериватизацией.
4 Реактивы
П
р
и
отс
у
тств
ии
с
п
е
ци
а
л
ь
ныху
к
аза
ний
и
с
п
о
л
ьз
ую
тр
е
а
к
т
и
в
ы
то
л
ь
к
о
п
р
и
з
н
а
нных
а
н
а
ли
т
ич
е
с
к
их
маро
кк
ва
ли
ф
и
к
а
ции
х
ч
.
или
ч
.
д
.
а
.
4.1 Вода,
н
е
ни
ж
е
1
-
й
степени, по [
1)
.
Вода
н
е
до
л
ж
н
асод
е
ржать орга
нич
е
с
к
и
е
п
р
и
м
е
с
и
.
4.2 Хлорид натрия
п
о ГО
С
Т4233
.
4.3 Йод кристаллический
п
о ГО
С
Т4159
.
4.4 Афлатоксин, кристаллический или в виде пленочной ампулы.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Афлатоксины канцерогенны для человока. Следует принимать во вни
мание заявление, сделанное Международным агентствами по исследованиям в области рака
(ВОЗ) (см [2]. [3]).
Необходимо надлежащим образомпредохранять лабораторию, вкоторой проводятсяанализы, от
дневного света. Для этого закрывают окна фольгой, поглощающей ультрафиолетовое излучение.
Допускается использоватьв комбинации с затемненным освещением (когда отсутствуетпрямоесолнеч
ноеосвещение) занавески или шторы в комбинации с искусственнымосвещением.
4.5 Ацетонитрил, степень чистоты для ВЭЖХ.
4.6 Метанол по
ГО
С
Т 6995
.
ст
е
п
е
н
ь
чи
стот
ы
В
Э
Ж
Х
.
4.7 Толуол по ГОСГ5789.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Толуол огнеопасен и токсичен. Приготовление стандартов с использо
ванием данного растворителя следует проводить в вытяжном шкафу. Операции за пределами
вытяжного шкафа, такие какизмерение эталонов методом УФ спектрометрии, следует проводить с
использованием эталонов в закрытых контейнерах.
4.8 Смесь толуол/ацетонитрил
Смешивают 98 объемных частей толуола (4.7) с двумя объемными частями ацетонитрила (4.5)
(см. предупреждение в4.7).
4.9 Растворитель для экстракции
Смешиваютсемь объемных частей метанола (4.6) с тремя объемными частями воды (4.1).
Другие смеси — растворителидляэкстракции, которыесовместимы сподвижной фазой, могут так
жеиспользоваться, если покажут себяболее эффективнымиили будутрекомендованы производителем
иммуноаффинной колонки.
4.10 Подвижная фаза
Смешивают три объемные части воды (4.1) с одной объемной частью ацетонитрила (4.5) и одной
объемной частью метанола (4.6). Перед использованием проводят дегазацию раствора.
4.11 Реагентдля послеколоночной дериватизации
Растворяют 100 мг йода(4.3) в2 см3метанола(4.6). Добавляют 200
см3
воды (4.1), перемешиваютв
течение 1ч. фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм (5.8). Раствор готовят на
неделю использования ихранят втемноте или в склянке изкоричневого стекла. Перед использованием
раствор встряхивают в течение 10 мин.
4.12 Основные стандартные растворы афлатоксинов В,, В2, G, и G2
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Растворы, содержащие афлатоксины, предохраняют от действия све
та (хранят в темноте, используют алюминиевую фольгу или затемненную стеклянную посуду).
Афлатоксины В,. В2. G, и G2растворяют по отдельности в смеси толуол/ацетонитрил (4.8). для
получения индивидуальных растворов с массовой концентрацией вещества 10мкг/см3.
2