ГОСТ 31716—2012
8.2 Определение
8.2.1Необходимые количества компонентов инкубационной смеси вносят, используя соот
ветствующую пипетку (см. 6.5), в кювету (см. 6.12) спектрофотометра (см. 6.11) в соответствии с таб лицей
1.
Т а б л и ц а 1— Аналитическая схема ферментативного определения L- и D-молочных кислот (L- и D-лактатое)
Обозначение кювет
Реактивы, дозируемые
в
кювету,
c
m
j
Контрольная
проба
Стандарт
О’Пактата лития
Стандарт L-пактата
Л
ИТИР
Проба
Дистиллированная вода
1.000
—
—
—
Стандарт (см. 8.1.2)
—
1.000
1,000
—
Проба (см. 7.4.3)
—
—
—
1.000
Буферный раствор. pH 10 (см. 5.6)
1.000
1,000
1,000
1.000
Раствор НАД’ (см. 5.7)
0.200
0,200
0,200
0.200
ГПТ (см. 5.10)
0.020
0,020
0,020
0.020
L-ЛДГ (см. 5.8)
0.020
—
0,020
0.020
D-ЛДГ (см. 5.9)
0.050
0.050
—
0.050
Содержимое всехкюветперемешивают при помощипластикового шпателя (см. 6.10) илизакрыва
юткювету ипереворачивают несколькораз. Послеперемешиваниякюветы выдерживают5 мин при ком
натной температуре перед тем. как измерить оптическую плотность (Аьои As0) инкубационной смеси во
всех кюветах относительно воды при длине волны 340 нм.
Через 45 мин измеряют повторно оптическую плотность инкубационной смеси во всех кюветах
(Аа45иAU5) относительно воды при длине волны 340 нм.
Следующее измерение проводят через 60 мин. Измеряют оптическую плотность инкубационной
смеси во всех кюветах (Ай60и Aifl0) относительно воды при длине волны 340 нм.
L- или D-молочную кислоту и ЬГО-лактаты можно определять отдельно путем добавления либо
L-ЛДГ (см. 5.8), либо D-ЛДГ (см. 4.9).
В случав измерений только L-молочной кислоты и L-лактатов оптическую плотность измеряют
через 30 и45 мин после перемешивания соответственно.
8.2.2 Фактическоезначение оптической плотностиА, которое будет использовано в вычислениях
по 9.1. рассчитывают поформуле
А = ((Ai«) - Ай) - 4(Авбо - Ai4s)] - [(Ateo - Аьо)- 4(At£o- A
ms
)],(3)
гдеА4б0— оптическая плотность пробы через 60 мин по8.2.1;
Аьа— оптическая плотность пробы по 8.2.1;
А,45 — оптическая плотность пробы через45 мин по8.2.1:
Аь60 — оптическая плотностьконтрольной пробы через 60 мин по 8.2.1:
Ао0— оптическая плотность контрольной пробы по 8.2.1;
Ам5 — оптическая плотность контрольной пробы через 45 мин по8.2.1.
Иногда может иметь место медленно текущая побочная реакция. Влияние на оптическую плот
ность, оказываемое данной побочной реакцией, может бытьустранено путем экстраполяции коптичес
кой плотности при нулевом времени.
В случае определения только L-молочной кислоты и L-лактатов (см. 8.2.1) оптическую плотность
измеряют через 30 и 45 мин соответственно поформуле
А = ((А^45- Аьо)- 3(A
u
5 _ ^аза)] - [{Aws “ Аьо)- 3(AMS- Аь30)).(4)
гдеAt30— оптическая плотность пробычерез 30 мин по8.2.1;
Аьзо — оптическая плотность контрольной пробы через 30 мин по8.2.1.
8.2.3 Если увеличение оптической плотности, рассчитанноесогласно8.2.2, превышает0,500еди
ниц, определение повторяют согласно 8.2.1—8.2.3, используя пробус подходящейстепенью разбавле
ния (см. 7.4.3).
5