ГОСТ 31716—2012
А.3.8 Всегда используютодин и тотже тип кюветдля измерения оптической плотности пробы и контрольного
определения.
А.3.9 Стеклянные или кварцевые кюветы всегда помещаютеодинаковое положение едержателе кювет.Для
этих целей помечаютоднуоптическую сторону кюветы. На грани пластиковых кювет, предназначенной для измере
ния оптической плотности, нанесена специальная метка.
А.4 Фотометры и спектрофотометры
А.4.1 Используют спектрофотометр (ширина спектральной полосы пропускания S10 нм) с монохроматором,
фотометр, снабженный фильтрами (ширина спектральной полосы пропускания фильтров s 10 нм), или спектраль
ный фотометр, снабженный ртутной лампой. Измерения, проводимые с использованием спектрофотометра или
фотометра, осуществляют при длине волны, соответствующей максимальной оптической плотности НАДН и
НАДФН. т. е. при 340 нм. Измерения, проводимые с использованием спектрального фотометра с ртутной лампой,
осуществляют при 365 или 334 нм.
П р и м е ч а н и е — Коэффициенты оптической плотности (экстинкции) НАДН и НАДФН, измеренные при
334. 340 и 365 нм, являются следующими:
а) НАДН и НАДФН при 334 нм (Нд). 6.18 к 106 см2/моль:
б) НАДН и НАДФН при 340 нм (Нд): 6.3 * 106 см2/моль;
с) НАДФН при 365 нм (Нд): 3.5 к 106 см2/моль,
О) НАДН при 365 нм (Нд): 3.4 х 106 см2/моль.
А.4.2 Технические характеристики спектрофотометра, фотометра или спектрального фотометра должны
обеспечиватьлинейную зависимостьмеждузначениямиоптической плотности (вплотьдо2,000 ед.)и концентраци
ей НАДН или НАДФН. Линейную зависимость проверяют следующим образом.
a) отбирают пипеткой 2.000 см3дистиллированной воды в кювету иизмеряют оптическую плотность
А0
отно
сительно воды;
b
) отбирают пипеткой 0.100 см3 раствора НАДН (0.5 мг/см3) в кювету, перемешивают содержимое кюветы и
измеряют оптическую плотность А,.
Рассчитывают сниженную оптическую плотность Ал по формуле
А , “А0).2.1/3,5.(А.1)
Повторяют процедуру проверки линейной зависимости 14 раз. как это описано выше.
После каждой пары измерений рассчитывают сниженную оптическую плотность
А,п
поформуле
Ат-{ А п-
АД-У/З.в.(А.2)
где
Ап
— оптическая плотность при измерении л;
V
— обьем содержимого кюветы при измерении
п,
см3.
Для каждого измерения строятграфикзначенийобъема раствора НАДН вкювете ссоответствующими значе
ниями сниженной оптической плотности. Значение корреляции измерений должно быть более 0.99. Для текущей
поверки спектрофотометра, фотометра или спектрального фотометра может быть использована методика, опуб
ликованная в (3).
А.5 Автоматические пипетки и другие дозирующие устройства
А 5.1 Используют автоматические пипетки идругие дозирующие устройства а соответствии с инструкциями
производителя.
А.5.2 Используют надлежащие наконечники для каждой пипетки.
А.5.3 Необходимо периодически (например, ежемесячно) проверять технические параметры, касающиеся
объема и повторяемости автоматических пипеток идругих дозирующих устройств, как это указано ниже.
Взвешивают стеклянный химический стакан с дистиллированной водой при значении времени f. Отбирают
пипеткой или дозирующим устройством один объем воды в стакан и точно взвешивают при (/♦ 1) мин после первого
взвешивания. Повторяютпроцедуруотбора объема воды пипеткой или дозирующим устройством девятьраз. Взве
шивают стакан без отбора объема воды пипеткой или дозирующим устройством в моменты (f ♦ 11).
(1
+ 12). (/♦ 13), (/ ♦
14) и (f ♦ 15) мин. Рассчитывают из этих взвешиваний потери на испарение за минуту. Рассчитывают объем и
повторяемостьдозирования воды пипеткой или дозирующим устройством, принимая во внимание потерю воды при
испарении.
А.5.4 Передача тепла от ладони руки во время продолжительного использования может повлиять на объем
дозируемой пробы при использовании некоторых автоматических пипеток.
Необходимо проверить это явление путем процедуры, описанной в А.5.3, и избегать использования таких
пипеток.
А.5.5 Непосредственно перед использованием следует ополоснуть наконечник пипетки несколько раз
раствором/суспензией. которая будет использована для отбора идозирования.Для каждого растворапробы следу ет
использовать новый наконечник.
А.5.6 Отбирают пипеткой растворы пробы, буфера, фермента и кофермента, опуская наконечник как можно
ниже, в различные углы кюветы.
8