ГОСТ 31716—2012
b) для преобразования в присутствии L-глутамата пирувата в L-аланим и L-глутамата в а-кетоглу-
тарат — глутамат-пируват-трансаминазу (ГПТ).
Количество образовавшегося НАДН. которое пропорционально содержанию L- и D-молочной кис
лоты иL- иD-лактатов, определяютспектрофотометрически измерением оптической плотности инкуба
ционной смеси при длине волны 340 нм.
5Реактивы
Используют реактивы толькоустановленнойаналитической степеничистоты. Вода, используемая
для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной. полученной на стеклян
ном оборудовании, авода, используемая для других целей, должна бытьдистиллированной.
5.1 Раствор калия гексацианофоррата(Н), с(K4[Fo(CN)J ЗН20) = 35,9 г/дм3
Растворяют в воде 35.9 г тригидрата калия гексацианоферрата (II). Разбавляют водойдо 1000см3
и перемешивают.
5.2 Раствор цинка сульфата, с(ZnS04 7Н20) = 71,8 г/дм3
Растворяют в воде 71.8 г гептагидрата сульфата цинка. Разбавляют водой до 1000 см3 и переме
шивают.
5.3 Растворы натрия гидроксида
5.3.1 Раствор Iнатрия гидроксида, с (NaOH) = 10моль/дм3
Растворяют в воде 400 г натрия гидроксида. Разбавляют водойдо 1000см3и перемешивают.
5.3.2 Раствор II натрия гидроксида, с (NaOH) = 0,1 моль/дм3
Растворяют 4.0 гнатрия гидроксида в воде. Разбавляютводойдо 1000 см3 и перемешивают.
5.4 Раствор глицерина (C3H80j), собъемной долей глицерина 50 %
5.5 Раствор аммония сульфата, с [(NH4)2SOJ = 3,2 моль/дм3
Растворяют422.84 гаммония сульфата в воде. Разбавляют водой до 1000 см3и перемешивают.
5.6 Буферный раствор, pH 10
Растворяют 7,92 г глицилглииина (C4HaN20 3) и 1.47 г L-глутаминовой кислоты (C6HgN04) в 80 см3
воды. Устанавливают pH (10,010,1) при 20 °С раствором Iгидроксида натрия (см. 5.3.1) ипри постоян
ном перемешиваниидоводят объем раствора водой до 100 см3.
Раствор хранят не более 3 мес при температуре от0 X до 5 °С.
5.7 Раствор никотинамид-аденин-динуклсотида (НАД)
Растворяют 350 мг никотинамид-аденин-динуклеотида (C21H27NrO,4P2) в 10см3воды.
Полученныйрастворхранятв течение 1меспри температуреот 0 *Сдо5 вС. Во время использова
ния сосуд с растворомдолжен быть погружен в емкость сдробленым льдом.
5.8 L-лактатдегидрогоназа (L-ЛДГ), из суспензии мышцы свиньи
10 мг суспензии L-лактатдегидрогеназы растворяют в 1см3раствора глицерина (5.4). pH получен
ной суспензии должен быть около 7. Если удельная активность L-ЛДГ менее 5500 ед./см3, проводят
повторное приготовление раствора фермента согласно вышеприведенным указаниям.
Раствор L-ЛДГстабилен в течение 12мес при хранении при температуреот0 °Сдо 5 °С.
Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и
выдерживают вледяной бане.
5.9 О-лактатдегидрогоназа (D-ЛДГ) (из культуральной жидкости Lactobacillus leichmannii)
5 мг суспензии D-ЛДГрастворяют в 1см3раствора сульфата аммония (см. 5.5). pH полученной сус
пензиидолжен быть около6. Удельнаяактивность D-ЛДГдолжна быть не менее 1500ед./см3 при 25 °С.
Если это нетак. приготовляютдругую суспензию D-ЛДГ.
Суспензия D-ЛДГстабильна в течение 12 месприхранении притемпературе от 0 °Сдо 5 °С.
Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и
выдерживаютв ледяной бане.
5.10 Глутамат-пируват-трансаминаза (ГПТ), из свиного сердца
20 мг суспензии ГПТ растворяют в 1.0 см3раствора сульфата аммония(см.5.5). pH полученной сус
пензии должен быть около 7. Удельная активность суспензии глутамат-пируват-трансаминазы должна
быть не менее 1600 ед./см3при 25 ’С. Если этоне так, приготовляютдругую суспензию ГПТ.
2