ГОСТ Р 52842—2007
4.1.3 Растворители
Если требуются специальные растворители или иные химикаты для растворения реактивов, то
должнобыть гарантировано, чтоданные специальные растворители или иныехимические вещества не
оказывают влияния на результаты анализа.
4.1.4 Подготовка образцов
4.1.4.1 Общие положения
Для расширенной оценки (например, обобщение полученных данных) все необходимые разведе
ния делают в одной партии, чтобы избежатьрасхождений в точности взвешивания, разведения ираз
личий в состоянии «отрицательного молока».
Подготоека образцов для исследования— чрезвычайно трудоемкая задача для лаборатории,
проводящейоценкуметода. Целесообразно использовать централизованную лабораторию, осуще
ствляющую подготовкуобразцов и предоставляющую заинтересованнымлабораториям образцыв
стабилизированнойформе (например, вглубокойзаморозке илилиофилизированными).
4.1.4.2 Выбор концентраций
Процедура выбора концентраций для определения предела обнаружения приведена в 4.2.2. Ори
ентировочно. если неоговореноособо, концентрация, предполагаемая какпредел обнаружения, долж
набытьпроанализированав сравнениисконцентрациейнауровеньбольшеееи сдвумя илитремяуров
нями концентраций меньшими, чем предполагаемый предел обнаружения, атакже с соответствующим
«отрицательным молоком». Полученные данные допускается использовать для установления кон
центраций, дающих 25 %. 50 %, 75 % и 95 %положительных результатов. Рекомендуется разделять
ранги концентраций, дающих от 50 %до 100 %положительных результатов на три или четыре равных
отрезка уровней (слинейной илогарифмической шкалой соответственно), какпоказано на рисунке 1.
4.1.4.3 Разведение
Необходимо соблюдатьследующие предосторожности при приготовлении серии разведений ана
лизируемых веществ:
а) Приготовление серии разведений следует проводить таким образом, чтобы только впослед
немразведении применялось молоко. Это необходимо дляпредотвращения связывания вещества с
белком:
б) Концентрация стандартного водного раствора антибактериального вещества в послед
немразведениимолоком должна быть одинакова длявсехобразцов исоставлять менее 1%.
4.1.4.4 Консервация
Консервацию образцов предпочтительнее осуществлять лиофилизацией. если это согласова
нос разработчиком/производителем исходя изданных исследований илипринципа метода. Рекоменду
ется следующаяпроцедураконсервации:
а) Сразу после подготовки различныхпробмолока все разведения в необходимом объеме разли
вают в пробирки изамораживают в наклонном положении при минус (18 з.2) вС;
б) Лиофилизация должна быть проведена максимально быстро, но не позднее недели после
замораживания. В процессе лиофилизации температура недолжна превышать25 °С;
в) Сразупослелиофилизациипробирки герметично запаиваюти хранят в темноте при температу
ре невыше 6 °С;
г) Образцы восстанавливают дистиллированной водой. Добавляемый объем водыдолжен быть
на 10%меньшеобъема лиофилизированного молока, компенсируемогосухим остатком молока.
д) Восстановленныеобразцыиспользуютв день восстановления. Используемыевосстановлен
ныеобразцы хранят в холодильнике иуничтожают в конце рабочегодня;
е) Допускается консервировать образцы путемглубокой заморозки или сиспользованием некото
рых химических консервантов (см. 4.2.5.3).
4.1.5 План эксперимента
4.1.5.1 Число повторностей
Желательно,чтобы эксперимент представлялсобой «слепое» исследование и максимальносоот
ветствовал рекомендациям разработчика/проиэводителя о числе повторностей иусловиях опыта. Для
качественного метода процент положительных результатов от общего количества анализируе
мых образцов не зависит от общего числа повторностей для каждой концентрации аналита. Про
центный расчет в общем случае требует не менее 10—20 повторностей для каждой выбранной
концентрации. Если требуется определенная статистическая достоверность, то рассчитывают необхо
димое число повторностей. Например, с целью подтверждения должно быть проанализировано не
менее 60 образцов для определения показателя 90 % отрицательных результатов с вероятностью
95 %(т. е.один или два положительных результата из 60проанализированных образцов).
4