ГОСТ ISO 11133-1—2011
П р и м е ч а н и е — Может происходить перегревание, когда в автокпаве стерилизуются большие объемы
сред (1000 см ).
Контроль эффективности стерилизации является существенным в приготовлении культуральных
сред.
После нагревания следует охлаждать среды способом, предотвращающим выкипание. Это осо
бенно важно для чувствительных сред, например, предназначенных для Enterobacteriaceae. и сред,
автоклавируемых в больших объемах.
4.3.7.3 Стерилизация фильтрацией
Стерилизация фильтрацией может быть выполнена в вакуумных или герметичных условиях.
Используютмембраны ифильтровальныеэлементысдиаметром пор0,22мкм. Онидолжны бытьстери
лизованы вавтоклаве. При приобретенииэлементов фильтраимембран в стерильном состоянии при их
использовании следуют инструкциям изготовителя. Стерилизуют различные части аппарата фильтра
циивсобранном илиразобранномсостоянии вавтоклаве в течение 15 мин притемпературе 121 °С. Если
необходимо, после автоклавирования сборку в стерильных условиях осуществляют в ламинарном
шкафус очищенным потоком воздуха.
П р и м е ч а н и е — На некоторых фипьтровальных мембранах могут задерживаться белки (такие как анти
биотики). Чтобы получать необходимую концентрацию, пользователь должен использовать предварительно увлаж
ненный фильтр.
4.3.7.4 Мониторинг(слежение)
Послеавтоклавирования, кипяченияилифильтрации во всехсредахпроверяютзначениеpH. цвет,
стерильность и консистенцию.
4.3.8 Приготовление добавок
Коммерческие добавки, содержащие токсические агенты, особенно антибиотики, следует приго
товлять с осторожностью, избегая распыления порошка, который может вызывать аллергические или
другие реакции у персонала лаборатории. При приготовлении добавок необходимо соблюдать технику
безопасности и следовать инструкциям изготовителя. Не допускается использоватьдобавки с просро
ченным сроком годности. Например, длярабочихрастворовантибиотикасрокгодности истекаетвтотже
самыйдень. При определенныхобстоятельствах растворы антибиотикадопускается хранить в заморо
женном состоянии в соответствующих объемах (аликвотах). Не допускается их повторноезаморажива
ние после оттаивания. Потенциальная потеря активности вследствие замораживания должна быть
обсуждена с изготовителем или определена пользователем.
4.4Подготовка к использованию
4.4.1 Плавление агаровых культуральных сред
Плавление культуральнойсреды осуществляют, поместивеев кипящую водяную банюили любым
другим способом, дающим идентичные результаты (например, в автоклаве с проходящим потоком
пара). Среды, которые ранее были автоклавированы, повторно нагревают втечениеминимального вре
мени. чтобы сохранять качество среды. Следует избегать перегрева и удалять среду из водяной бани,
когда она расплавилась. Охлаждают расплавленную средудо температуры (47
±
2) аС в водяной банес
контролем температуры в течение времени до ее использования. Время, необходимоедлядостижения
температуры 47 °С. зависитотвидасреды, объема иколичества флаконовв водянойбане. Расплавлен
ную среду следует использовать как можноскорее, по возможности, сразу, но не более чем через4 ч.
4.4.2 Деаэрация культуральных сред
Если необходимо, до использования нагреваюткультуральную средув кипящей воде или в потоке
пара в течение 15 мин. приоткрыв крышку или пробку; после нагревания крышки или пробки плотно
закрывают ибыстро охлаждаютдо необходимойтемпературы.
4.4.3 Введение дополнительных добавок
Термолабильные (неустойчивые к нагреванию) добавки следует добавлять в среду после ее
охлаждениядо (47
i
2)°С. Стерильнаядобавка переддобавлением кагаровойсредедолжнабытьдове
дена до комнатной температуры. Холодные жидкости могут привести к образованию геля из агара или
сформировать прозрачные хлопья. Все добавки добавляют в среду осторожно и перемешивают до
полного растворения, затем наливают в конечные контейнеры, по возможности, максимально быстро,
насколько это возможно.
4.4.4 Приготовление и хранение сред в чашках Петри
Разливают агаровую среду в чашки Петри, чтобы получить слой толщиной не менее 2 мм (напри
мер. длячашекдиаметром 90 мм обычнотребуется 15 см3среды).Чтобыдать агаровойсреде охладить
ся и застыть, чашки Петри, закрытые крышками, помещают на прохладную, горизонтальную
поверхность.
7