ГОСТ ISO 11133-1—2011
ных исследованиях. Если дистиллированную воду приготавливают из хлорированной воды, хлор
необходимо нейтрализовать переддистилляцией.
Дистиллированную воду следует хранить в контейнерах, изготовленных преимущественно из
инертных материалов (например, нейтральное стекло, полиэтилен и т. д.). которые до их начального
использованиядолжны бытьсвободными от веществ, ингибирующих рост микроорганизмов.
П р и м е ч а н и е — В некоторых случаях может быть необходимо использовать свежеприготовленную воду,
свободную от растворенной в ней двуокиси углерода.
Дистиллированная вода хорошего качества должна иметь удельное сопротивление, по меньшей
мере. 300000 Ом см.
Предупреждение! Вода, пропущенная через ионообменные устройства (деионизированная),
может быть обсеменена высоким количеством микроорганизмов; желательно такую воду не использо
ватьбезподтверждения низкого содержанияв ней микроорганизмов. Законсультациейо выборелучше
го метода минимизации заражения микроорганизмами можно обратиться к изготовителю. Значительно
загрязненная микроорганизмами деионизированная вода, которая была стерилизована фильтровани
ем. может содержатьдостаточно веществ, подавляющих рост некоторых микроорганизмов.
4.3.3 Взвешивание и перегидратация (растворение)
Тщательно взвешивают соответствующее количество сухой (обезвоженной) среды при соблюде
нии мер предосторожности, чтобы не вдохнуть порошок, особенно для среды, содержащей ядовитые
вещества. Для растворения постепенно добавляют требуемое количество воды, избегая образования
комков.
4.3.4 Растворение и дисперсия
Сухие (обезвоженные)среды нуждаются вбыстройдисперсиипутем постоянного перемешивания
с нагреванием, если необходимо, для растворения. Средам, содержащим агар, нужно дать несколько
минутдля впитывания воды с перемешиваниемдо нагревания. Длясред, приготовляемыхизотдельных
компонентов, каждый компонент необходимодобавлять отдельно иполностью растворять, преждечем
окончательнодовести до конечногообъема.
4.3.5 Измерение и получение нужного значения pH
pH измеряют, используя pH-метр. иполучают необходимоезначение pH. еслисредуприготовляют
из отдельных компонентов в лаборатории таким образом, чтобы после стерилизации и охлаждения до
температуры 25 °С среда имела требуемое значение pH
±
0,2 единицы pH. если нет других
указаний. Нужное значение pH получают с помощью гидроокиси натрия (NaOH) концентрацией
приблизительно 40 г/л (приблизительно 1мол/л) или соляной кислотой (HCI) приблизительно 36.5 r/л
(приблизительно 1мол/л).
П р и м е ч а н и е — Имеющиеся в продаже готовые среды могут показывать существенные изменения зна
чения pH до и после автоклавирования. Однако если используют дистиллированную или деионизированную воду
хорошего качества, то получение нужного значения pH до автоклавирования не требуется.
4.3.6 Разливка
Среду разливаютв соответствующиеконтейнеры, имеющиеобъем, в 1,2 — 3 разапревосходящий
объем среды.
4.3.7 Стерилизация
4.3.7.1 Общие положения
Стерилизацию культуральных сред и реактивов можно выполнять, используя стерилизацию горя
чим паром (см. 4.3.7.2) или фильтрацией (см. 4.3.7.3).
Определенныесреды не нуждаются в стерилизации автоклавированием иихдопускается исполь
зовать после кипячения. Например, среды для выращивания Enterobacteriaceae. содержащие брилли
антовый зеленый, особенно чувствительны к нагреванию и действию и после кипячения должны быть
быстро охлаждены и защищены от сильного света. Также некоторые реактивы допускается использо
вать без стерилизации (см. соответствующий международный стандарт или инструкции изготовителя).
4.3.7.2 Стерилизация горячим паром
Стерилизацию горячим паром осуществляют в автоклаве или в специальном аппарате для приго
товления культуральных сред. Обычно автоклавирование проводят в течение 15 мин при температуре
121 °С. Для объемов более чем 1000 см3цикл стерилизации адаптируют соответствующим образом. Во
всех случаях следуют инструкциям, данным в стандарте, и инструкциям изготовителей. Работу
автоклава контролируютс помощью показаний термопар ииндикаторныхполосокпри типичныхуслови
ях. чтобы гарантироватьдостижение желаемого температурного профиля.
6