ГОСТ Р ИСО 11133-1—2008
ных исследованиях. Если дистиллированную воду приготавливают из хлорированной воды, хлор
необходимо нейтрализовать переддистилляцией.
Дистиллированную воду следует хранить в контейнерах, изготовленных преимущественно из
инертныхматериалов (например, нейтральноестекло, полиэтилени т.д.). которыедолжны бытьсвобод
ными от ингибирующих рост микроорганизмов, веществдо их начального использования.
П р и м е ч а н и е — В некоторых случаях может быть необходимо использовать свежеприготовленную воду,
свободную от растворенной в ней двуокиси углерода.
Дистиллированная вода хорошего качества должна иметь удельное сопротивление, по меньшей
мере. 300000 Ом см.
Предупреждение! Вода, пропущенная через ионообменные устройства (деионизированная),
может быть обсеменена высоким количеством микроорганизмов; желательно такую воду не использо
ватьбезподтверждения низкогосодержанияв ней микроорганизмов. Законсультациейо выборелучше
го метода минимизации заражения микроорганизмами можно обратиться к изготовителю. Значительно
загрязненная микроорганизмами деионизированная вода, которая была стерилизована фильтровани
ем. может содержатьдостаточно веществ, подавляющих рост некоторых микроорганизмов.
4.3.3 Взвешивание и перегидратация (растворение)
Тщательно взвешивают соответствующее количество сухой (обезвоженной) среды при соблюде
нии мер предосторожности, чтобы не вдохнуть порошок, особенно для среды, содержащей ядовитые
вещества. Для растворения постепенно добавляют требуемое количество воды, избегая образования
комков.
4.3.4 Растворение и дисперсия
Сухие (обезвоженные)среды нуждаются вбыстройдисперсиипутем постоянного перемешивания
с нагреванием, если необходимо, для растворения. Средам, содержащим агар, нужно дать несколько
минутдля впитывания воды с перемешиванием до нагревания. Длясред, приготовляемыхизотдельных
компонентов, каждый компонент необходимодобавлятьотдельно иполностью растворять, преждечем
окончательнодовести до конечногообъема.
4.3.5 Измерение и получение нужной pH
pH измеряют, используя pH-метр. и получают необходимую pH. если среду приготовляют из
отдельныхкомпонентов влабораториитаким образом, чтобы после стерилизациии охлаждениядо тем
пературы 25 °С среда имела требуемое значение pH + 0.2 единицы pH. если нет других указаний. Нуж
ноезначение pH получаютс помощью гидроокиси натрия (NaOH) концентрацией приблизительно 40 г/л
(приблизительно 1 мол/л) или соляной кислотой (HCI) приблизительно 36.5 r/л (приблизительно
1мол/л).
П р и м е ч а н и е — Имеющиеся в продаже готовые среды могут показывать существенные изменения pH
до и после автоклавирования. Однако если используют дистиллированную или де-ионизированную воду хорошего
качества, то получение нужной pH до аквтоклавирования не требуется.
4.3.6 Разливка
Средуразливаютв соответствующиеконтейнеры, имеющиеобъем в 1.2 — 3 раза, превосходящий
объем среды.
4.3.7 Стерилизация
4.3.7.1 Общие положения
Стерилизацию культуральных сред и реактивов можно выполнять, используя стерилизацию горя
чим паром (см. 4.3.7.2) или фильтрацией (см. 4.3.7.3).
Определенныесреды не нуждаются в стерилизации автоклавированием иихдопускается исполь
зоватьпосле кипячения. Например, среды для выращивания Enterobactehaceae. содержащие брилиаи-
товый зеленый, особенно чувствительны к нагреванию и действию и после кипячения должны быть
быстро охлаждены и защищены от сильного света. Также некоторые реактивы допускается использо
вать без стерилизации (см. соответствующий международный стандарт или инструкции изготовителя).
4.3.7.2 Стерилизация горячим паром
Стерилизацию горячим паром осуществляют в автоклаве или в специальном аппарате для приго
товления культуральных сред. Обычно автоклавирование проводят в течение 15 мин при температуре
121 °С. Для объемов более чем 1000 см3, цикл стерилизации адаптируют соответствующим образом. Во
всехслучаяхследуютвсоответствиис инструкциями, даннымив стандарте, иинструкциям изготови
телей. Работу автоклава контролируют с помощью показаний термопар и индикаторных полосок при
типичныхусловиях, чтобы гарантироватьдостижение желаемоготемпературного профиля.
6