ГОСТ Р ИСО 10993-16—2009
- качественными, использующими общую ауторадиографию;
- полуколичественмыми, использующими выборочную ауторадиографию постандартным полям.
5.2.3.2 Обычно при изучении процесса распределения временем отбора проб является ^ввх,
т.е. 24 и 168 ч или более, в зависимости от времени выведения исследуемого вещества. Отбор проб в
промежуточные интервалы времени проводят, когда требуются дополнительныеданные. Более частый
отбор проб обычно выполняют на ранних фазах абсорбции и выведения. При этом берут как можно
больше проб в течение фазы выведения (теоретически 3—4 периода полувыведения) для того, чтобы
обеспечить более точное определение параметров.
Основным решающим фактором является чувствительность метода.
5.2.4 Метаболизм и экскреция
5.2.4.1 Клетки для содержания животных при изучении метаболизма должны позволять прово
дить отдельный сбор мочи и фекалий навсехэтапах исследования. При длительности исследованийдо
14 сут мочу и фекалии отбирают отдельно в течение 24 ч и потом — через каждые 24 ч до конца экспе
римента. Иногда план исследований может предусматривать эвтаназию животных на промежуточных
стадиях.
Пробы могут быть отобраны раньше 24 ч. когда есть вероятность быстрого выведения исследуе
мого вещества или его метаболитов. При длительных исследованиях отбор проб в начальном периоде
проводяттак же. какдля кратковременных исследований. Затем пробы отбирают непрерывно в течение
24 ч через установленный интервал времени.
П р и м е ч а н и е — Использование клеток для изучения метаболизма при длительных исследованиях мо
жет быть вредным для здоровья животных. Поэтому при продолжительном эксперименте для получения достовер
ных результатов пробы собирают через определенные интервалы времени, и эти результаты экстраполируются,
как при непрерывном отборе проб.
5.2.4.2 Трупы животных и/или их органы-мишени сохраняют для исследований, а кровь этих жи
вотных забирают для определения концентрации веществ в плазме и цельной крови. После отбора
проб в момент эвтаназии клеткидля исследований метаболизма, моче- и калосборники моют специаль
ными растворителями. Возможно накопление полученных смывов и сохранение репрезентативной
части для анализов.
5.2.4.3 Когда используют вещество, помеченное радиоизотопами (см. примечание ниже), восста
новление или расчетное восстановление исследуемого вещества в нормедолжно быть (100 ± 10) %. Ко
личество исследуемого вещества в каждой фракции анализируют с помощью установленных процедур
для каждого меченного или не меченного радиоизотопами вещества в соответствующей среде. При ис
пользовании веществ, меченных радиоизотопами, проводят оценку как первичного вещества, так и ме
таболитов. если при этом не были использованы специальные методики. Если вещество, меченное
радиоизотопами, не восстанавливается в достаточном количестве в экскрете (фекалиях и/или моче)
или в организме подопытного животного, рассматривают необходимость сбора выдыхаемого воздуха.
П р и м е ч а н и е — Не во всех случаях достижима требуемая степень восстановления. Причины любых от
клонений регистрируют и обосновывают в отчете об исследованиях.
5.2.4.4 Уровни радиоактивности в биологической среде определяют подсчетом, например мето
дом сцинтилляции жидкости. Однако следует подчеркнуть, что в данном методе используется смешан
ная концентрация вещества и его метаболитов, поэтому на ее основе не могут быть определены
кинетические параметры. Там. где необходимо отделение метаболитов, используют ряд процедур экс
тракции и хроматографических методов анализа (например, методы высокоэффективной жидкостной
хроматографии, хроматографии в тонком слое сорбента — тонкослойной хроматографии, газожидкос
тной хроматографии), а полученный материал характеризуют посредством ряда химических и физи
ко-химических методов (например, масс-спектрометрический метод, спектроскопический метод
ядерно-магнитного резонанса).
П р и м е ч а н и е — Существует научная литература по применению культур тканей, клеток, гомогенатов и
изолированных ферментов для изучения метаболизма в опытах In vitro. Эти методы, в отличие от методов In vivo.
позволяют прогнозировать пути метаболизма, когда вещество локализуется в недоступном для исследований мес те.
Следует отметить, что степени и скорости метаболизма при определении методами in vitro и In vivo часто отли
чаются.
5