ГОСТ Р 51600—2010
бирки пипеткой по ГОСТ 29227 отбирают по 5—10 см3 анализируемой пробы молока, нагревают на
водяной бане при температуре (87 ± 2) °С в течение (101 1) мин и охлаждают в холодной воде до тем
пературы 18 °С—25 °С.
б) Приготовление обезжиренного стерильного молока
Обезжиренное стерильное молоко получают из молока, предварительно проверенного на отсут
ствие ингибирующих веществ по ГОСТ 23454. с кислотностью 16— 18 °Т при помощи сепаратора-слив
коотделителя. Обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют при 101 кПа (1
атм.) в течение (10 ± 1) мин.
5.1.1.6 Приготовление контрольного раствора стрептомицина
Контрольный раствор стрептомицина используютдля проверки активности роста спор тест-куль-
туры.
а) Приготовление фосфатных буферных растворов 1 и 2
Раствор 1: в мерной колбе вместимостью 1000 см3в небольшом количестве дистиллированной
воды растворяют 2.0 г двузамещенного фосфорнокислого калия по ГОСТ 2493 и 8,0 г однозамещенно-
го фосфорнокислого калия по ГОСТ4198 идоводят объем дистиллированной водой до метки. Устанав
ливают pH раствора (6.1 ± 0.1) с помощью растворов гидрата окиси калия по 3.39 или соляной
кислоты по 3.40.-
Раствор 2: в мерной колбе вместимостью 1000 см3в небольшом количестве дистиллированной
воды растворяют 16,73 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 0.523 г однозамещенного фос
форнокислого калия и доводят объем дистиллированной водой до метки. Устанавливают pH
раствора (7.910.1) с помощью растворов гидрата окиси калия или соляной кислоты.
Растворы стерилизуют при температуре (112 ± 2) вС в течение (30 i 1) мин.
Срок хранения растворов в холодильнике при температуре (5 ± 1) °С — не более 30 сут.
б) Приготовление основного раствора стрептомицина с массовой концентрацией 500 мкг/см3
(5 ± 1)мгстрептомицина по (3] растворяют в конической колбе вместимостью 25 см3в фосфатном
буферном растворе 1. Соотношение фактического значения массовой концентрации стрептомицина к
объему буферного раствора 1должно быть 1:100.
Пример — При массовой концентрации стандарта стрептомицина 760 мке/см35 ме антибиотика
(5 мг) растворяют в 7.6 см3 буферного раствора 1. получив основной раствор с массовой концентрацией
500 мкг/см3.
5.1.2.3 Чашки Петри выдерживают при комнатной температуре в
течение 20 мин, затем их помещают втермостат крышками вверх и инкуби
руют при температуре (55 ± 1) °С в течение 4 ч. Чашки в термостате размещают в один ряд.
Срок хранения основного раствора стрептомицина в посудо из темного стекла с притертой проб
кой при температуре (5 ± 1) “С — не более 30 сут.
в)Приготовление контрольного раствора стрептомицина с массовой концентрацией 2.5 мкг/см3
Подготавливают три стерильных пробирки вместимостью 10 см3. В первую пробирку наливают
1 см3 фосфатного буферного раствора 2 и 1 см3 основного раствора стрептомицина, во вто рую
— 9 см3фосфатного буферного раствора 2 и 1см3раствора из первой пробирки, в третью — 9 см3
стерильного обезжиренного молока по 5.1.1.5 б) и 1 см3раствора из второй пробирки.
Массовая концентрация стрептомицина в разведениях составляет соответственно 250: 25 и
2,5 мкг/см3. Третье разведение с массовой концентрацией 2.5 мкг/см3является контрольным раство
ром.
Срок хранения контрольного раствора стрептомицина — не более 12 ч.
Допускается вместо контрольного раствора стрептомицина использовать предварительно вос
становленный по ГОСТ 23454 (аналогично) препарат СКИВ по (2).
5.1.2 Проведение определения
5.1.2.1 На поверхности агаровой среды, разлитой в чашки Петри
по 5.1.1.4. пробойником по 3.14 или пробочным сверлом вырезают семь
лунокдиаметром 10 мм (см. рисунок 1). Шестьлунок располагают по окруж
ности чашки на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 28 мм их
центров от центра чашки. Седьмую лунку вырезают в центре чашки в слу чае
использования контрольного раствора стрептомицина.
5.1.2.2 В шесть лунок, расположенных по окружности чашки, пипет
кой по 3.23 вносят по 0.05 см3 анализируемого молока, подготовленного
по 5.1.1.5 а). В центральную лунку вносят 0.05 см3контрольного раствора
стрептомицина.
Рисунок 1 — Схема распо
ложения лунок
5