ГОСТ Р 51600—2010
5 Методы контроля
5.1 Чашечный метод с Bacillus stearothermophilus
Метод основан на способности антибиотиков, содержащихся в молоке, диффундировать в агаро
вую среду со спорами Bacillus stearothermophilus и препятствовать их росту, что приводит к образова
нию прозрачных зон ингибиции. Наличие антибиотиков в молоке устанавливают по размеру диаметра
зоны ингибиции.
5.1.1 Подготовка к определению
5.1.1.1 Подготовка лабораторной посуды — по ГОСТ Р 51446.
5.1.1.2 Приготовление сред
Питательная среда: в мерной колбе по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см3в небольшом количес
тведистиллированной воды по ГОСТ 6709 растворяют 10,0 г дрожжевого экстракта по 3.32. 20.0 г пеп
тона по ГОСТ 13085. 0.5 г глюкозы по ГОСТ 975. доводят объем раствора дистиллированной водой до
метки и потенциометрическим анализатором по 3.7 устанавливают активность питательной среды
(7,1 ± 0,1) единиц pH. Затем в необходимое количество конических колб по ГОСТ 25336 вместимостью
250 см3 наливают по 200 см3 приготовленной питательной среды и стерилизуют в стерилизаторе по
3.11 при температуре (12112) °С в течение (15 ± 1) мин.
Срок хранения питательной среды в холодильнике при температуре (5 ± 1) °С — 1 мес.
Агаровая среда: в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 200 см3вносят 100 см3дистиллиро
ванной воды, 1.0 ггидролизата кормовыхдрожжей. 0.4 г пептона. 0,1 г хлористого натрия по ГОСТ4233 и
1,6 г микробиологического агара по ГОСТ 17206, перемешиваютдо полного растворения и нагревают на
электроплитке до кипения. Затем агаровую среду охлаждают до температуры (55 ± 5) °С, устанав
ливают активность агаровой среды (7.3 ± 0,1) единиц pH и стерилизуют при температуре (121 ± 2) вС
в течение(15
1
1) мин.
Срок хранения агаровой среды в холодильнике при температуре (5 ± 1) °С — 1 мес.
Допускается применять среды промышленного изготовления, аналогичные указанным выше.
5.1.1.3 Получение спор тест-культуры
Питательную среду, подготовленную по 5.1.1.2. засеивают 2—3 см3тест-культуры No 1 по 3.42,
выращенной в пробирках с этой же средой в течение 18—20 ч, тщательно перемешивают, помещают в
термостат и нагревают при температуре (55 ± 1) “С в течение 3 сут.
После окончания инкубации из посевов берут мазки, окрашивают их спиртовым раствором основ
ного фуксина по 3.31 с массовой концентрацией 50 г/дм3 и микроскопируют. При наличии в колбах с
посевами90 %—95 % свободных сформировавшихся спор колбы помещают в холодильник на 16— 18 ч
для осаждения спор. Образовавшуюся надосадочную жидкость из колб сливают, а оставшийся
осадок распределяют по стерильным центрифужным пробиркам и прогревают на водяной бане при
темпера
туре (67 i 2) еС в течение (30
1
1)мин. После этого пробирки помещают на центрифугу по 3.3 и центри
фугируют20—30 мин. Полученный осадок в каждой пробирке промываютдистиллированной водой (не
менее трех раз) до получения прозрачной жидкости над ним.
Взвесь спор повторно нагревают при температуре (67 i 2) X в течение (30
а
1) мин и переносят в
пробирки.
Срок хранения спор тест-культур в холодильнике при температуре (5 ± 1) X — не более 2 мес.
5.1.1.4 Приготовление засеянной агаровой среды
В пробирки отбирают взвесь спор тест-культуры, подготовленной по 5.1.1.3, и разводятдистилли
рованной водой до получения суспензии спор, визуально соответствующей 10 единицам по стандар
тному эталону мутности по [1].
К 100 см3 расплавленной и охлажденной до (60i2)°C агаровой среды, подготовленной
по 5.1.1.2. добавляют 2,5 см340 %-ного водного раствора глюкозы и4 см3суспензии спор, подготовлен
ной как указано выше. Смесь агаровой среды и суспензии спор тщательно перемешивают и градуиро
ванной пипеткой разливают по (11 ±1) см3 в подготовленные для определения чашки Петри по
ГОСТ 25336, установленные на горизонтальной поверхности.
Чашки Петри с засеянной смесью агаровой среды и суспензии спор допускается хранить в холо
дильнике при температуре (5± 1) °С не более 2 сут. Перед проведением определения чашки Петри
прогревают в термостате при температуре (55 ± 1) °С в течение (20 ± 1) мин.
5.1.1.5 Подготовка проб и приготовление обезжиренного стерильного молока
а) Подготовка проб
Определению на наличие антибиотиков подлежат пробы молока, давшие положительный резуль
тат по ГОСТ 23454 и отрицательный — по ГОСТ 24065. ГОСТ 24066, ГОСТ 24067. В стерильные про-
4