ГОСТ Р ИСО 11133-2—2008
Целевые микроорганизмы должны оцениваться в2балла ииметь типичный внешний вид, размер и
морфологию колоний. Рост нецелевых микроорганизмов должен быть частично или полностью ингиби
рован (0 или1).
5.4Методы, применяемые в отношении жидких культуральных сред
5.4.1 Общие положения
Для определения производительности жидкой среды необходимо использовать подходящий ино кулят.
Количественный, лолуколичественный икачественный методы, описанные ниже, позволяют оце
нить производительность и селективность. Предлагаемые методы регистрируют степень роста после
надлежащей инкубации путем культивирования или штрихового посева изжидких сред наагаровые сре
ды и подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) или вычисления баллов для жидкой среды. В случае
качественных методовдля жидких сред характеристические реакции оценивают визуально.
5.4.2 Количественный метод разбавления для целевых и нецелевых микроорганизмов
Данный метод также пригоден для оценивания новых культуральных сред или разбавителей.
5.4.2.1 Процедура
Отбирают нужноечисло пробирок или порций по 10см3каждой партии испытуемой жидкой среды.
Инокуляция целевых микроорганизмов: инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон,
используя каждыйтест-микроорганизмс малым содержанием (например, от 10до 100 КОЕ вкаждой про
бирке; о приготовлении инокулята см. 5.2.1). иперемешивают.
Инокуляция нецелевых микроорганизмов: инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон,
используя каждый тест-микроорганизм с более высоким содержанием (> 1000 КОЕ вкаждой пробирке: о
приготовлении инокулята см. 5.2.1). и перемешивают.
Инокуляция целевых инецелевых микроорганизмов каксмешанной культуры: для испытаний сме
шанных культур в селективных средах инокулируют испытуемый бульон и эталонный бульон малым
количеством целевых микроорганизмов (например, от 10до 100 КОЕ на каждую пробирку; о приготовле
нии инокулята см. 5.2.1) и в ту же пробирку вносят значительное количество нецелевых микроорганиз
мов (> 1000 КОЕ вкаждую пробирку; о приготовлении инокулята см. 5.2.1), иперемешивают.
Инокуляция целевыхинецелевых микроорганизмов вразбавителяхитранспортных средах: иноку
лируют разбавители тест-микроорганизмами (например, от 100до 1000 КОЕ вкаждую пробирку; о приго
товлении инокулята см. 5.2.1) и перемешивают.
Соблюдают время и температуру инкубации, установленные встандартных методах.
Разбавители должны инкубироваться втечение 45 мин при комнатной температуре и затем быть
разлиты почашкам. Транспортныесреды должны инкубироваться при соответствующей температуре и
нужное время всоответствии с обычным использованием и затем быть разлиты почашкам.
Берут аликвотный объем или. при необходимости, разбавление каждого бульона после инкубации
и распределяют вчашке с неингибирующим агаром, как это описано в5.3.1.
П р и м е ч а н и е — Для испытаний смешанных культур необходимо проводить распределение, когда это
возможно, на чашках с неселективным агаром, которое позволяет достичь дифференциации микроорганизмов в
смешанной культуре (например, для подсчета видов Escherichia coll и Salmonella используется агар с чашечным
подсчетом с MUG). В случае, когда невозможно различить смешанные культуры на неселективном агаре, следует
использовать среды с селективным агаром при условии, что были предварительно испытаны их эксплуатационные
характеристики.
5А.2.2 Снятие результатов, расчеты и интерпретация
После инкубации проводят подсчет колоний целевых и нецелевых микроорганизмов, в случае,
если всмешанных культурах можно различить разные типы. Расчеты и интерпретацию следует прово
дить с учетом цели исследования:
1) сравнительная интерпретация между эталонным и испытуемым бульонами, используя значе
ния PRи Sf, какэто описано в4.2.3.2 и 4.2.3.3:
- для целевых микроорганизмов Р„ не должен быть < 0,1 (разница в росте не превышает одного
порядка величины):
- для нецелевых микроорганизмов SFдолжен достигать по меньшей мере 2;
- всмешанных культурах рост целевых микроорганизмов не должен ингибироваться нецелевыми
микроорганизмами, т.е. целевые микроорганизмы должны всегда быть доминирующей популяцией;
2) вдругихслучаях, когда достигается фиксированное минимальное количество целевых микро
организмов и максимальное количество нецелевых микроорганизмов, более уместно, что:
- содержание целевых микроорганизмов должно достигать от 106КОЕ/см3до 10еКОЕ/см3;
- содержание нецелевых микроорганизмов не должно превышать 104 КОЕ/см3 в селективном
бульоне:
7