ГОСТ Р 53139—2008
Т а б л и ц е 3 — Схема дозирования и смешивания реактивов для ферментативного определения аскорбино
вой кислоты при использовании иммобилизованной АО
Дозирование о Ktonety
Контрольная проба
Проба
Рабочий раствор МТТ (см. 6.2.2)
Дистиплированная вода
Проба (см. 6.3)
Иммобилизованная АО
1.000 СМ*
1.500 см5
0.100 см3
Один шпатель
1.000 см*
1.500 см*
0.100 см3
—
Перемешивают. Помещают контрольную кювету и кювету с пробой в термостат при температуре 37 ‘ С. В течение 6
мин интенсивно перемешивают содержимое кюветы с контрольной пробой шпателем с иммобилизованной АО с
целью насыщения инкубационной смеси воздухом (необходимое условие полного окисления аскорбиновой кис
лоты в контрольной пробе!). После выдержки в контрольной кювете и в кювете с пробой измеряют значение опти-
ческой плотности А\. Продолжают реакцию добавлением.
Рабочий раствор ФМС (см. 6.2.3)0.100 см*0.100 см3
Перемешивают. Инкубируют (в темноте!) при температуре 37 4С в течение 15 мин, после чего немедленно изме
ряют значение оптической плотности А2 в кювете с контрольной пробой и в кювете с пробой.
7 Обработка результатов измерений
Значение разницы между конечным и начальным значениями оптической плотности контроля и
пробы рассчитывают по формуле
2
^ =(А - Л, и - ( Л2* А иО)
Значение разницы оптических плотностей лА должно составлять не менее 0.100.
Искомую массовую концентрацию аскорбиновой кислоты в исходной пробе, г/дм3, рассчитывают
по общей формуле
с »
v~ ™
АД.(2 )
r. d ■v -1000
где V — общий объем инкубационной смеси, см3;
v — объем пробы, см3;
MW— молекулярный вес аскорбиновой кислоты или аскорбата (176.13 и 175,12 г/моль соответствен
но);
d — длина оптического пути кюветы, см:
с —
молярный коэффициент оптической плотности формазана (при измерении и длине волны
578 нм составляет 16,9 дм3/ммоль ■см).
Подставляя в формулу (2) необходимые значения для аскорбиновой кислоты, получают модифи
цированную формулу (3) для расчета массовой концентрации аскорбиновой кислоты (в г/дм3) в пробе:
2.70-176.13
■ДА = Q2814- ДА(3)
16,9 1 0,100 1000
Если перед ферментативным определением проба подвергалась разбавлению, то результат, по
лученный по формуле (3). умножают на коэффициент разбавления F.
В случае концентрированных соков или пюре результатопределения выражают в г/100 г продукта.
Расчет осуществляют с учетом навески, взятой для получения восстановленного продукта (см. 6.3), по
формуле
с = -1-100.(4)
т
где с — массовая концентрация аскорбиновой кислоты в исследованной пробе, рассчитанная по фор
муле (2), г/дм3;
т — навеска концентрированного сока или пюре, взятая для получения восстановленного продукта
(см. 6.3), г.
6