ГОСТ Р 53139—2008
агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информа
ционному указатепю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по
соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если
ссылочный стандарт заменен (изменен), то при попьзовании настоящим стандартом спедует руководство ваться
заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в ко тором
дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Обозначения и сокращения
В настоящем стандарте применены следующие сокращения и обозначения:
МТТ — бромид 3-(4.5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия.
ФМС — переносчик электронов — феназинметосульфат.
МТТ — формазан — комплекс МТТ и формазана.
АО — аскорбатоксидаза.
4 Сущность метода
Аскорбиновая кислота (витамин С) и другие редуцирующие вещества (х - Н2) восстанавливают
бромид 3-(4.5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия (МТТ) в присутствии переносчика
электронов феназинметосульфата (ФМС) при pH 3.5 до комплекса МТТ-формазана. В кювете с пробой
измеряют сумму редуцирующих веществ:
Аскор6иновая_кислота (х - Н2) + МТТ —?■-—-> дегидроаскор6иновая_кислота(х)
♦ МТТ-формазан + Н \
Для обеспечения специфичного определения аскорбиновой кислоты в контрольной кювете прово
дят окисление аналита аскорбатоксидазой (АО) в присутствии кислорода воздуха. Образующаяся де-
гидроаскорбиновая кислота не взаимодействует с МТТ и ФМС:
Аскорбиновая_кислота +1/202 —двгидроаскорбииовая_кислота + Н20.
Количество образовавшегося комплекса МТТ-формазан. эквивалентное количеству аскорбино
вой кислоты в исходной пробе, определяютспектрофотометрическим измерением оптической плотнос
ти исследуемого раствора пробы при длине волны 578 нм.
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 26313. подготовка проб — по ГОСТ 26671.
6 Проведение определения
6.1 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
Гидроокисъ калия по ГОСТ 24363. ч. д. а., раствор молярной концентрации с(КОН) = 10 моль/дм3.
Поливинилполипирролидон (код пищевой добавки Е1202) с содержанием основного вещества не
менее 95 % по (1].
Фосфорнокислый однозамещенный 2-водный натрий, NaH2PO., -2НгО по ГОСТ 245, ч. д. а.
Лимонная кислота моногидрат. C6HsOr •Н20, по ГОСТ 3652, ч. д. а.
Аскорбиновая кислота. C6Hg06 по (2), [3], х. ч.
Формалин по ГОСТ 1625. раствор с объемной долей 5 %.
3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2.5-дифенил-2Н-тетраэолий бромид (МТТ) с содержанием основного
вещества не менее 95 % по [1].
Феназинметосульфат (феназин/ФМС) с содержанием основного вещества не менее 95 % по [1].
Аскорбатоксидаза (сухой лиофилизат/АО). Е 1.10.3.3 с содержанием основного вещества не ме
нее 95 % по [1].
Метафосфорная кислота. (НРОд)„. по ГОСТ 841. раствор массовой концентрации 15 г/дм3.
Дистиллированная вода по ГОСТ 6709.
Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длине волны 578 нм. или фотометр
фотоэлектрический с шириной спектральной полосы не более 10 нм идопустимой абсолютной погреш-
2