ГОСТ Р 53139—2008
В случае медленнотекущей реакции, вызванной попаданием света, значениеоптической плотнос
тиА: системы определяют в соответствии с рекомендациями 6.4.5. Так как кюветы с пробой и контроль
ной пробой содержат одинаковый объем инкубационной смеси, медленно текущие реакции в них
идентичны. От экстраполяции в этом случае можно отказаться. Однако необходимо принимать во вни
мание, что оптическую плотность А2 в кювете с контрольной пробой и в кювете с пробой необходимо
измерять непосредственно одну за другой.
Если разница оптических плотностей (А2—Л,) контрольной пробы менее 0,020. то следует соблю
дать следующие правила: рабочий раствор МТТдолжен храниться в темноте: при использовании рабо
чего раствора МТТ его нельзя подвергать прямому облучению солнечным или электрическим светом;
содержимое кюветы с контрольной пробой необходимо интенсивно перемешивать стеклянной или
пластиковой палочкой (или шпателем с иммобилизованной АО) с целью насыщения инкубационной
смеси воздухом; после внесения в инкубационную смесь рабочего раствора ФМС кюветы с контрольной
пробой и пробой защищают от солнечного или электрического света.
8.4.3 Стабильность аскорбиновой кислоты
Водные растворы аскорбиновой кислоты нестабильны. При анализе твердых проб рекомендуется
проводить выделение аскорбиновой кислоты раствором метафосфорной кислоты концентрации 15
г/дм3. После экстрагирования pH вытяжки корректируют раствором гидроокиси калия (10 моль/дм3) до
3.5—4,0.
Для стабилизации аскорбиновой кислоты не рекомендуется применять растворы оксалатов, так
как их ионы ингибируют аскорбатоксидазу.
Разбавление пробы дистиллированной водой или метафосфорной кислотой проводят непосред
ственно перед определением. В этом случае нет необходимости в проведении корректировки pH до
3.5—4.0.
8.4.4 Медленно текущие реакции
Из практики применения метода следует, что оптическая плотность инкубационной смеси может
увеличиваться даже после окончания ферментативной реакции (возникает медленно текущая реак
ция). В этом случае расчет значения конечной оптической плотности проводят экстраполированием на
момент внесения в инкубационную смесь рабочего раствора ФМС (см. 6.2.3).
Экстраполяцию проводят графическим способом или согласно следующей схеме: по истечении
15 мин после добавления в кюветы рабочего раствора ФМС (см. 6.2.3) проводят измерение оптической
плотности (А,), измерения повторяют каждые две минуты до тех пор, пока приращение
А
А/д t не
будет принимать постоянные значения. Измерения останавливают и действительное значение
конечной опти ческой плотности инкубационной смеси на момент внесения рабочего раствора ФМС
(см. приложение А) рассчитывают по формуле
15 ДАШ
(5)
2
Затем по формуле (1) рассчитывают значение разницы между значениями конечной и начальной
оптической плотности контроля и пробы.
8.5Контроль ферментативного определения
Контроль определения осуществляют при необходимости проверки качества реактивов, оценки
уровня квалификации персонала лаборатории, осуществляющего анализ аскорбиновой кислоты, а так
же для выявления и устранения случайных и систематических ошибок определения.
8.5.1 Приготовление стандартного раствора аскорбиновой кислоты
Берут навеску в 200 мгаскорбиновой кислоты и количественно переносят ее в мерную колбу вмес
тимостью 100 см3. Объем раствора в колбедоводятдо метки метафосфорной кислотой (15 г/дм3),затем
тщательно перемешивают. Переносят 10см3приготовленного раствора в другую мерную колбу вмести
мостью 100 см3,затемдоводят объем раствора до метки метафосфорной кислотой (15 г/дм3). Содержи
мое колбы тщательно перемешивают.
Стандартный раствор аскорбиновой кислоты стабилен в течение суток при температуре 20 °С. в
течение трехдней притемпературе 4 ®С и в течение одной недели при минус 20 °С. В схемахдозирова
ния и определения (таблицы 2, 3 и 4) допускается использовать в качестве внешнего стандарта только
свежеприготовленный стандартный раствор аскорбиновой кислоты.
8