ГОСТ Р 53139—2008
8.5.2Применение стандартного раствора аскорбиновой кислоты в качестве внутреннего
стандарта
Ферментативное определение с применением стандартного раствора аскорбиновой кислоты
(см. 6.5.1) в качестве внутреннего стандарта проводят по следующей схеме дозирования (см. табли
цу 4):
Поформуле (1) рассчитывают разницу значений оптических плотностей для кювет «Проба ♦ стан
дарт (внутренний)», «Стандарт (внешний)» и «Проба». Степень повторного нахождения (ПН. %)для ас
корбиновой кислоты, содержащейся в стандартном растворе (см. 6.5.1), рассчитывают по формуле
р
пн = 2
лл
" ^.inn(6)
■^стандарт
Ферментативное определение проведено без ошибок, если степень повторного нахождения ас
корбиновой кислоты находится в интервале от 95 % до 100 %.
Т а б л и ц а 4 — Схема дозирования и смешивания реактивов для ферментативного определения с использо
ванием раствора аскорбиновой кислоты в качестве внешнего и внутреннего стандарта <8.5.2)
Дозируют
в кювету
Контрольная
проба
Проба
Стандарт
(контроль)
Стандарт
(внешний)
Контроль
♦
стандарт
(внутренний)
Проба
•
стандарт
(внутренний)
Рабочий раствор
МТТ (см. 6.2.2)
1.000 см3
1,000 см1
1.000 см3
1,000
С М 1
1
.000 см3
1.000 см3
Дистиллирован
ная вода
1.4904 см3
(1.500*см3)
1.490" см3
(1.500*см3)
1.490"
С М 3
(1.500* см3)
1,490"
С М 3
(1.500* см3)
1.490" см3
(1,500*СМ3)
1,490" см3
(1.500*см3)
Проба (см. 6.3)
0.100 см3
0,100 см3
—
—
0.050 см3
0,050 см3
Стандартный
раствор аскорби
новой
К И С Л О Т Ы
(см. 6.5.1)
0,100 см3
0,100 см3
0.050 см3
0,050 см3
Рабочий раствор
АО (см. 6.2.4) или
иммобилизован
ная АО
0.0101*см3
—
(один шпа
тель21)
0,010" см3
—
(один шпа
тель2’)
0,010* см*
—
(один шпа
тель21)
Перемешивают. Помешают кюветы в термостат при 37 ’*С. 8 течение 6 мин интенсивно перемешивают содержи
мое контрольных кювет с целью насыщения инкубационной смеси воздухом (необходимое условие полного окис
ления аскорбиновой кислоты!). После выдержки измеряют значение начальной оптической плотности А1.
Продолжают реакцию добавлением.
Рабочий раствор0.100 см30,100 см30.100 см30,100 см3
0.100
см30,100 см3
ФМС (см. 6.2.3)
Перемешивают. Инкубируют (в темноте!) при температуре 37 “С в течение 15 мин. после чего немедленно изме
ряют значение конечной оптической плотности А2.
При использовании рабочего раствора АО (см. 6.2.4).
* При использовании иммобилизованного препарата АО (например, шпателя с иммобилизованной АО).
8.6 Граница чувствительности метода
Граница чувствительности метода составляет 0.30 мг/дм3 при ЛА = 0.015 (при 578 нм) и макси
мальном объеме пробы v в 1.490 (или 1,600) см3.
8.7 Линейность определения
Линейность определения сохраняется в интервале от 0.5 мкг аскорбиновой кислоты в кювете
(0,3 мг аскорбиновой кислоты/дм3пробы: объем пробы — v= 1,600 см3) до 20 мкг аскорбиновой кислоты
в кювете (0,2 г аскорбиновой кислоты/дм3пробы; объем пробы v = 0,100 см3).
9