ГОСТ Р 53139—2008
8 Дополнительные указания
8.1 Факторы, влияющие на определение
Если общая разница оптических плотностей ДА менее 0,100. то необходимо повторно провести
определение, используя ббльшую навеску или увеличенный объем пробы, дозируемой в инкубационную
смесь (до 1,490 см3 по схеме дозирования таблицы 2 илидо 1.500см3посхемедозирования таблицы 3). В
этом случае объем воды, добавляемой в кювету, должен быть уменьшен на соответствующее значение
для сохранения общего объема инкубационной смеси (2.70 см3) в кювете с неизменными контролем ипро
бой. Увеличенный объем пробы необходимо принимать во внимание при расчете конечного результата со
гласно формуле (3).
8.2 Специфичность определения
Метод специфичендляопределенияобщей аскорбиновой кислоты, включающей D- и L-изомеры.
В анализе коммерческих препаратов аскорбиновой кислоты (например, витаминов) в свежеприго
товленных растворах можно ожидать, что степень повторного нахождения искомого вещества составит
94 %—100 %. На качество результатов определения степени повторного нахождения влияет срок хране
ния коммерческого препарата аскорбиновой кислоты ирастворитель, используемыйдля получения рас
творов. Рекомендуется использовать раствор метафосфорной кислоты (см. 4.1) сдоведением pH пробы
до 3.5—4,0.
На стабильность аскорбиновой кислоты в водных растворах сильно влияет присутствие ионов ме
таллов. напримержелеза и меди, а также наличие в пробе кислорода. В этом случае ожидаемая степень
повторного нахождения будет составлять менее 100 %, что обусловливается частичной потерей аскор
биновой кислоты.
Спомощью настоящегоферментативного метода нельзя определить L-аскорбилпальмитат, так как
в ходе щелочного гидролиза происходит спонтанное разрушение свободной аскорбиновой кислоты.
8.3 Причины возможных ошибок при проведении определения
Сахароза, содержащаяся в соках и соковой продукции, не мешает определению, если ее концен
трация в кювете не превышает 30 мг.
Определению аскорбиновой кислоты мешает D-сорбит (при концентрации более 20 мг в кювете),
который ингибирует аскорбатоксидазу. а также этанол в высоких концентрациях, превышающих 100
мг/кювета. Влияние большинства мешающих факторов на результат определения исключается пу тем
увеличения длительности инкубации контрольной пробы с аскорбатоксидазой до 10 мин.
Диоксид серы в высоких концентрациях, превышающих 50 мкг/кювета, взаимодействует с МТТ и
ФМС и вызывает тем самым медленно текущую реакцию. В этом случае пробу подвергают предвари
тельной обработке согласно 6.3.3.
Ионы металлов в концентрациях более 100 мкг/кювета могут понизить pH системы и. тем самым,
ингибировать действие аскорбатоксидазы.
Нитрит, который может содержаться в некоторых овощных соках, не мешает определению. Однако
его присутствие в системе может привести к спонтанному распаду аскорбиновой кислоты.
Ионы оксалата в концентрациях от 30 мкг/кювета способны оказывать значительное ингибирующее
действие на аскорбатоксидазу. Высокую концентрацию оксалата устраняют путем добавления ионов каль
ция до концентрации 30 мкг/кювета и выше, а также созданием в системе слабокислой среды (pH 5—6).
8.4 Выявление и устранение мешающих факторов при проведении анализа.
Контроль ферментативного определения
8.4.1 Общие указания
Если разница оптических плотностей ДАменее 0.100. следует провести повторную подготовку про
бы к определению, увеличив ее навеску или уменьшив разбавление. Значение pH пробы в любом опре
делении должно находиться в интервале от 3.5 до 4,0.
8.4.2 Операции с контрольной пробой
Содержимое кюветы с контрольной пробой интенсивно перемешивают стеклянной или пластико
вой палочкой (или шпателем с иммобилизованной АО2) в течение предварительной реакции.
После внесения рабочего раствора ФМС реакция проявляет повышенную чувствительность к све
ту. поэтому инкубирование при температуре 37 °С необходимо проводить в полной темноте. Для чего
кюветы, находящиеся, например, в держателе, помещенном в водяной или воздушный термостат, на
крывают плотной светонепроницаемой тканью. Попадание света приводит к возникновению нежела
тельной медленно текущей реакции.
7