ГОСТ Р 53139—2008
6.3.2 Прозрачные или мутные сильноокрашенные пробы
С помощью раствора гидроокиси калия молярной концентрации 10 моль/дм3проводят корректи
ровку pH пробы до значения 3.5—4.0. В зависимости от количества аскорбиновой кислоты пробу разбав
ляют дистиллированной водой или раствором метафосформой кислоты массовой концентрации
15 г/дм3 согласно таблице 1.
Для удаления природных красящих пигментов к 10 см3 пробы добавляют 100 мг поливинилполипир-
ролидона. Пробу перемешиваютв течение 1мин.затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр.
Для определения аскорбиновой кислоты используют визуально прозрачный слабоокрашениый
фильтрат в количестве 0.100 см3.
6.3.3 Подготовка проб, содержащих в повышенных количествах диоксид серы
К 10 см3пробы добавляют одну каплю разбавленного раствора формалина объемной долей 5 %.
Пробу перемешивают и выдерживают 5 мин при комнатной температуре. Значение pH пробы при необ
ходимости корректируют раствором гидроокиси калия (10 моль/дм3) и разбавляют согласно таблице 1.
Мутные пробы дополнительно фильтруют (см. 6.3.1. 6.3.2). Сильноокрашенные пробы обрабатывают
поливинилполипирролидоном согласно 6.3.2.
В определении по 4.5 используют от 0.200 до 0,500 см3 фильтрата.
6.4 Условия определения
Длина волны при фотометрическом измерении составляет 578 нм. Для измерения используют
стеклянную кювету" с толщиной оптического слоя 1см. равной ширине грани. Ферментативное опреде
ление проводят при температуре 37 °С. Общий объем инкубационной смеси в кювете составляет
2.70 см3.
Измерение оптической плотности инкубационной смеси проводят против воздуха (без кюветы в
световом пути прибора). Проба в инкубационной смеси в кювете должна содержать от 0,5 до 20 мкг ас
корбиновой кислоты в 0.1—1,6 см3пробы.
6.5 Ферментативное определение
Ферментативное определение аскорбиновой кислоты в пробе проводят по схеме дозирования и
смешивания реактивов, приведенной в таблице 2. Если в определении используют иммобилизованную
АО и готовые наборы реактивов, дозирование и смешивание реактивов проводят по схеме таблицы 3.
Т а б л и ц а 2 — Схема дозирования и смешивания реактивов для ферментативного определения аскорбино
вой кислоты
Дозирование а кювету
Контрольная проба
Проба
Рабочий раствор М ТТ" (см. 6.2.2)
Дистиллированная вода
Проба21(см. 6.3)
Рабочий раствор АО (см. 6.2.4)
1.000 см3
1,490 см3
0.100 см3
0.01 см1
1.000 см3
1.500 см3
0.100 см3
Перемешивают. Помещают контрольную кювету и кювету с пробой в термостат при температуре 37 *С. В течение 6
мин!>интенсивно перемешивают содержимое кюветы с контрольной пробой пластиковой или стеклянной палоч кой
с целью насыщения инкубационной смеси воздухом (необходимое условие полного окисления аскорбиновой
кислоты в контрольной пробе!}. После выдержки в контрольной кювете и в кювете с пробой измеряют значение
оптической плотности А,. Продолжают реакцию добавлением:
Рабочий раствор ФМС4> (см. 6.2.3)0.100 см30.100 см3
Перемешивают. Инкубируют (в темноте!) при температуре 37 ”С в течение 1S мин. после чего немедленно изме
ряют значение оптической плотности А* в кювете с контрольной пробой и в кювете с пробой.
Температура раствора должна составлять 37 ‘ С.
Перед дозированием в кювету пипетку или наконечник дозатора следует ополоснуть фильтратом пробы
(см. 6.3).
1: При определении аскорбиновой кислоты в пробах, содержащих повышенные количества диоксида серы,
время выдержки кюветы с контрольной пробой увеличивают до 10 мин.
После внесения рабочего раствора ФМС кюветы изолируют от доступа света.
11 Вместо кювет из оптического стекла допускается использование одноразовых юовет из полимерных мате
риалов.
5