ГОСТ Р 51441-99
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)
Схема проведения испытаний
Н а и м е н о в а н и е р а с т в о р о в
О б ъ е м в н о с и м ы х р а с т в о р о в , с м 5
К о н т р о л ь н о е и с п ы т а н и е
И с п ы т а н и е п р о б ы
В кювету вносят.
буферный раствор
раствор НАД/КоА
раствор АТФ
раствор пробы
воду
1,00
0,10
0.10
—
2,00
1.00
0.10
0,10
0,10
1,90
Перемешивают и измеряют оптическую плотность
А,-,
растворов через 3 мин. затем добавляют:
раствор МДГ/ЦС’0,020,02
Перемешивают и измеряют оптическую плотностьрастворов через 2 мин. Начинают проводить
реакцию, добавляя:
Суспензию АКС0.010,01
Перемешивают и после окончания реакции (через 15 мин) измеряют оптическую плотность
Ал
контрольного раствора и раствора пробы. Если реакция нс завершилась через 15 мин, продолжают
измерять оптическую плотность в течение 10 мин через каждые 2 мин, пока увеличение оптической
плотности нс станет постоянным.
ПРИЛОЖЕНИЕ Б
(справочное)
Проведение испытаний при «ползущих» реакциях
Отп*чос*е«ппотмость
Медленно текущие («ползущие») рсакиии происходят в основном из-за побочных реакций фермента,
присутствия других ферментов в матрице образна или взаимодействия одного или более компонентов матрицы
с реактивами ферментативной реакции.
При нормальной реакции постоянное
значение оптической плотности достигается в
течение определенного времени (от 10до 20 мин
в зависимости от скорости специфических фер
ментативных реакций). Но сети оптическая
плотность не стабилизируется, а неуклонно уве
личивается, то такой процесс называют «ползу
щей* реакцией. Оптическую платность при
«ползущей» реакции дополнительно измеряют с
регулярными интервалами (от 2 до 5 мин) после
времени, необходимого для достижения стан
дартным раствором конечной оптической плот
ности. При увеличении оптической плотности с
постоянной скоростью (т.с.
dA/dt —
величина
постоянная) 5 —6 измерений экстраполируют
графически, либо математически к оптической
платности раствора в точке прнбаатения пос
леднего фермента
{Т0).
Экстраполированную
разность оптических плотностей (Л11Шси —
AUJ_
Ч1Я0) н этой точке используют при подсчете
концентрации субстрата.
Рисунок Б.1 — «Ползущая» реакция
2337