ГОСТ Р 51441-99
выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора (Лаврове относительно
воздуха (приложение Л).
К содержимому кюветы добавляют 0,02 см5 раствора МДГ/ЦС, перемешивают, выдерживают
в течение 2 мин и измеряют оптическую плотность раствора (Л,)проЛ1 (приложение А).
В ту же кювет)’ добавляют 0,01 см" суспензии ЛКС, перемешивают и после завершения реакции
(через 10 — 15 мин) измеряют оптическую плотность раствора (/l2)npo0j относительно воздуха (при
ложение Л).
Завершение реакции проверяют измерением оптической плотности каждые 2 мин в течение
10 мин, чтобы установить момент начала увеличения значения оптической плотности на постоян
ную величину. При необходимости проводят экстраполяцию оптической плотности раствора в
точке прибавления последнего фермента. В этом случае при подсчетах используют
экстраполированную разность оптических плотностей (приложение Б).
8.4 Проведение контрольного испытания
В кювету вносят 1.00 см3 буферного раствора, 0,10 см’ раствора НЛД/КоЛ, 0,10 см3 раствора
А’ГФ и 2,00 см3 воды, перемешивают, выдерживают в течение 3 мин и измеряют оптическую
плотность раствора (4))KO,lipc,.u относительно воздуха. В кювет)’ добавляют 0.02 см3 раствора
МДГ/ЦС, перемешивают, выдерживают в течение 2 мин и измеряют оптическую плотность раствора
<А)котр«о. относительно воздуха.
В кювету с раствором добаатяют 0.01 см3 суспензии ЛКС, перемешивают, выдерживают в
течение 10— 15 мин и измеряют оптическую плотность (>^2)к&мтроль относительно воздуха.
9 Обработка и оформление результатов
k
.
.
Рассчитывают разность значений оптических плотностей, измеренных в контрольном испы
тании М, - A,)„uipOJl., (Л. - 4 >)
ohpou
и в испытании раствора пробы (
А
, - 4>)пров., (Л: - Л)„Ров4.
В связи с тем. что зависимость между разностью оптических плотностей и концентрацией
уксусной кислоты нелинейная, разность оптических плотностей, приходящуюся на уксусную
кислот)1(А
А),
вычисляют по формуле
. 1
I/ 1
I >
1 V
АЛ
__
l(/l2
^O/npoBii
IА —
\
*
IW
к
и
г
о
л
и
Л, АЛ
^ 1приби |
(
2
-
А
У п р » 1
/
к
и
л
T(ЛT T"i
Массовую концентрацию уксусной кислоты
х
, г/дм3, вычисляют по формуле
V.
А/
К
X
=
е/И,
-А Л
I I А
l
^О’ в
о
о
**.,.
1/4|
^
Л и )
M W | m t
I-
(
2
)
IQ"3,
(
3
)
где—суммарный обьем раствора в кювете, см3;
Л/ — молярная масса уксусной кислоты. Л/= 60,05 г/моль;
К
— фактор разведения пробы образца, равный отношению объема разведенной пробы к
объему пробы, взятому для разведения;
с — молярный показатель поглощения НАДН, дм3 •ммоль-1 •см-
при длине волны 340 нм — 6,3,
при длине волны 365 нм — 3,4,
при длине волны 334 нм — 6.18;
/ — рабочая длина кюветы, см;
К
— объем раствора пробы, взятый в кювету на анализ, см3.
Если соблюдены рекомендуемые объемы дозируемых в кювету растворов, то массовую кон
центрацию уксусной кислоты
х,
г/дм3, вычисляют по формуле
3.23 60.05
е
1 0,1
А
Л
«. 1.940 —.
(4)
Вычисления проводят до второго десятичного знака. Результат округляют до первого десятич
ного знака.
2315