ГОСТ Р 51441-99
7Полготовка к проведению испытаний
7.1 Приготовление буферного раствора pH = 8,4
В мерную колбу вместимостью 100 см’ вносят 7.59 г гидрохлорида триэтаноламина, 420 мг
яблочной кислоты и 210 мг хлористого магния, растворяют приблизительно в 70 см3 воды. Доводят
pH раствора до 8,4. добавляя около 21 см’ раствора гидроксида калия, доводят объем до отметки
водой. Буферный раствор устойчив в течение четырех недель при температуре 4 *С.
7.2 Приготовление расгвора никотинамидалени
1
глинуклеотида/коэнзима А
144 мг НАД и 30 мг КоА растворяют в 6 см’ воды. Раствор устойчив в течение одной недели
при температуре 4 *С.
7.3 Приготовление раствора аденоэин-5 -трифосфага
300 мг АТФ-№ 2Н2 и 300 мг бикарбоната натрия растворяют в 6 см3 воды. Раствор устойчив в
течение четырех недель при температуре 4 “С.
7.4 Приготовление суспензии малатдегидрогеназы/цитрат-еннтазы
Смешивают 0,6 см3 суспензии МДГ и 0,6 см3 суспензии ЦС. Суспензия устойчива в течение
одного года при температуре 4 "С.
7.5 Приготовление суспензии ацетил-КоЛ-сннтетазы
20 мг диофидизата АКС растворяют в 0,5 см3 раствора сернокислою аммония. Суспензия
устойчива в течение двух недель при температуре 4 *С.
7.6 Приготовление раствора сульфата аммония концентрацией
с
l(NH4)2S 0 4J = 1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 13,2 мг сернокислого аммония, растворяют
примерно в 80 см’ воды, доводят pH до 7,3, добавляя около 0,2 см3 раствора гидроксида калия,
доводят объем до отметки водой. Раствор устойчив в течение одного года при температуре от 20
до 25 *С.
7.7 Приготовление раствора ацетата, стандартный раствор, с(СН3СОО~) = 5 ммоль/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 68 мг уксуснокислого натрия, растворяют и
доводят до отметки водой. Перед использованием готовят свежий раствор.
8Проведение испытаний
8.1 Общие положения
Испытания проводят для пробы определенного объема и результаты выражают в виде массовой
концентрации уксусной кислоты. Для навески пробы, зная коэффициент разбавления пробы,
результаты выражают в виде массовой доли уксусной кислоты в процентах. Для продуктов с высокой
вязкостью и(или) высоким содержанием частиц мякоти (например для пульпы) испытания проводят в
навеске пробы.
Испытание проводят при постоянной температуре в интервале от 20 до 25 "С.
При использовании спектрофотометра измерения проводят только при длине волны, соответ
ствующей абсорбционному максимуму НАД — 340 нм. При использовании фотоэлектрического
колориметра измерения проводят со светофильтром длиной волны, соответствующей максимуму
пропускания 340 или 365 нм.
Растворы берут градуированными пипетками. Добавление растворов пробы, ферментов, ко-
ферментов и буферных растворов осуществляют соответствующими пипеточными дозаторами.
Выполняют два параллельных определения.
В каждую серию испытаний включают стандартный раствор уксусной кислоты.
Схема проведения испытаний приведена в приложении А.
8.2 Взятие пробы для анализа
Для испытаний берут такой объем пробы сока, чтобы содержание уксусной кислоты в кювете
было между 1 и 30 мкг (примерно 0,10 см3 пробы). Если концентрация уксусной кислоты меньше
10 мг/дм3, то объем пробы увеличивают до 1,5 см3. Используют пробу непосредственно после
разбавления, даже если она слегка окрашена.
8.3 Проведение испытания раствора пробы
В кювету спектрофотометра (фотоэлектроколориметра) вносят 1,00 см3 буферного раствора,
0.10 см3 раствора НАД/КюА, 0,10 см3 раствора АТФ. 0.10 см3 раствора пробы и 1.90 см3воды. Если
вносимый в кювету объем раствора пробы превышает 0,10 см3 (см. 8.2). вносимый объем воды
уменьшают так. чтобы суммарный объем пробы и воды составлял 2,0 см3. Смесь перемешивают.
4230