ГОСТ Р 51441-99
3 Обозначения и сокращения
3.1 Обозначения
13настоящем стандарте применяют следующие обозначения:
с —
молярная концентрация вещества;
g —ускорение силы тяжести.
3.2 Сокращения
13настоящем стандарте применяют следующие сокращения:
ЛКС — Ацетил-коэнзим А-сшгтетаза;
КоА — Коэнзим А;
АТФ —Аденозин-5’-трифосфат;
АМФ — Аденозин-монофосфат;
ЦС — Цитрат-синтаза;
НАД — |3-Никотинамидадениндинуклеотид;
НАДН — р-Никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;
МДГ — Малатдегидрогеназа;
ME — 1-я международная единица ферментативной активности, равная количеству фермента,
необходимого для катализа превращения I микромоля вещества за 1 мин при температуре 25 “С в
стандартных условиях.
4 Сущность метода
Уксусная кислота (ацетат) в присутствии фермента ацетил-коэнзима А-синтетазы (АКС) с
аденозин-5’-трифосфатом (АТФ) и коэнзимом А (КоА) превращается в ацетил-КоА:
АКС
Ацетат + АТФ + КоА^ацетил — КоА + АМФ + пирофосфат.
Ацетил-КоА реагирует с оксалоацетатом с образованием цитрата в присутствии цитрат-синта
зы (ЦС):
ЦС
Ацетил-КоА + оксалоацетат + Н ,0цитрат + КоА.
Оксалоацетат. необходимый для реакции (2), образуется из маната и никотинамидаденинди-
нуклеотида (НАД) в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ). В зтой реакции НАД восстанавлива
ется до НАДН.
МДГ
Манат т НАД*оксаноацетат + НАДН + Н*.
В основе метода лежит образование НАДН. количество которого определяют по увеличению
оптической плотности при длине волны 334 нм, 340 нм или 365 нм. Количество образовавшегося
НАДН зависит от концентрации уксусной кислоты, однако зависимость нелинейная.
5 Средства измерений, лабораторное оборудование, реактивы и материалы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания
20 г, 2-го класса точности.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания
500 г, 3-го класса точности.
Спектрофотометр, позволяющий проводил, исследования при длине волны 340 нм, с допус
тимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более I
%
или коло
риметр фотоэлектрический лабораторный с устройством для считывания значений оптической
плотности со светофильтром длиной волны, соответствующей максимуму пропускания (340 ± 10) нм
или (365 ± 10) нм, и допустимой абсолютной погрешностью измерения не более I
%.
Кюветы из кварца, оптического стекла или полистирола рабочей длиной 10 мм.
Иономер или pH-метр с погрешностью измерения не более 0,05 pH.
Пипетки по ГОСТ 29227 типа 3, исполнения 1, 1-го класса точности, вместимостью 1 и 10 см3.
2
228