ГОСТ ISO 10633-1—2022
3 Принцип метода
Экстракция глюкозинолатов в растворе метанола с последующей очисткой и ферментным
десульфированием на ионообменных смолах. Определение осуществляется обращенно-фазовой вы
сокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) в режиме градиентного элюирования и с уль
трафиолетовым детектором.
4 Реактивы
Используются реактивы чистые для анализа, если не указано иное, и вода, соответствующая
спецификациям для второй степени чистоты по ISO 3696.
4.1 Метанол, степень чистоты ВЭЖХ, раствор концентрацией 70 % (V/V).
4.2 Ацетат натрия, раствор концентрацией 0,02 моль/л, pH 4,0.
4.3 Ацетат натрия, раствор концентрацией 0,2 моль/л.
4.4 Формиат имидазола, раствор концентрацией 6 моль/л.
Для приготовления раствора формиата имидазола необходимо в мерной колбе вместимостью
500 см3 растворить 204 г имидазола в 113 см3 муравьиной кислоты. Довести водой до метки.
4.5 Внутренний стандарт
Используется синигрин моногидрат (моногидрат аллилглюкозинолата калия, Мг= 415,49) (см. А.1)
или глюкотропаеолин (бензилглюкозинолат, калиевая соль, Мг = 447,52) для семян рапса, так как в его
составе содержится синигрин (см. А.2).
В приложении А представлена подробная информация о приготовлении реактивов и контроле их
чистоты.
4.6 Подвижная фаза
4.6.1 Элюент А: вода, очищенная через фильтр 0,45 мкм и системой картриджей с активирован
ным углем1), или вода эквивалентной чистоты.
4.6.2 Элюент В: ацетонитрил, со степенью чистоты для ВЭЖХ, 20 % (V/V) раствор в воде, которая
была очищена и пропущена через фильтр 0,45 мкм. Концентрация может быть изменена в зависимости от
используемой колонки.
4.7 Ионообменная смола
4.7.1 DEAE Sepharose CL — 6В2), имеющаяся в продаже и готовая к использованию, или анало
гичный продукт.
4.7.2 Суспензия DEAE Sephadex А252)
10 г смолы DEAE Sephadex А25 (или другой аналогичной) смешивают с избыточным количеством
2 моль/л раствором уксусной кислоты. Дают отстояться. Добавляют раствор 2 моль/л уксусной кислоты
до тех пор, пока объем жидкости не станет равным объему осадка.
4.8 Сульфатаза, Helix pomatia типа Н1 (ЕС 3.1.6.1)3)
Очистка, анализ и разведение сульфатазы проводят в соответствии с методами, описанными в
А.3.1—А.3.4.
1) Система Norganic Millipore — пример подходящего и коммерчески доступного продукта. Эта информация
дана для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой данного реактива.
2) DEAE Sepharose иSephadex — пример подходящего икоммерчески доступного продукта. Эта информация
дана для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой данного реактива.
3) Sulfatase S-9626 (отSigma Chemicals) сактивностью 16600 единиц/г— пример подходящего икоммерчески
доступного продукта. Эта информация дана для удобства пользователей настоящего стандарта и не является
рекламной поддержкой данного реактива.
2