ГОСТ ISO 10633-1—2022
Необходимо продолжать высушивание до тех пор, пока содержание влаги и летучих веществ не будет
менее 10 % (m/m). Этот окончательный результат используют для расчета. Незамедлительно следует
перейти к определению содержания глюкозинолата (см. раздел 8) с использованием высушенного ис
следуемого образца.
8 Методика проведения анализа
Примечание 3 — Если требуется проверить, соблюдаются ли требования повторяемости, то проводят
два отдельных определения в соответствии с 8.1—8.4 и 8.6 в условиях повторяемости.
8.1 Отбор анализируемой пробы для анализа
В две пробирки (см. 5.6) А и В помещают по 100 мг подготовленной анализируемой пробы (см.
раздел 7), взвешенной с точностью до 0,1 мг.
8.2 Экстракция глюкозинолатов
8.2.1 Пробирки помещают в водяную баню (см. 5.7) и выдерживают 1 мин при температуре 75 °С.
Приливают 2 см3 кипящего раствора метанола (см. 4.1), после чего незамедлительно вносят:
- в пробирку А 200 мкм раствора внутреннего стандарта молярной концентрации 5 ммоль/л (см.
А.1.1); и
- в пробирку В 200 мкм раствора внутреннего стандарта молярной концентрации 20 ммоль/л (см.
А.1.2).
Примечание4 — В соответствии с 4.5 для использования альтернативного раствора внутреннего
стандарта.
8.2.2 Продолжают нагревать при температуре 75 °С еще в течение 10 мин, регулярно встряхивая
пробирки. Содержимое каждой пробирки перемешивают и центрифугируют при 5000 g в течение 3 мин.
Надосадочную жидкость из каждой пробирки (см. 5.6) переливают в две другие, обозначенные, соот
ветственно, как А’и В’.
8.2.3 В пробирки А и В, содержащие сухой осадок, добавляют 2 см3 кипящего метанола (см. 4.1)
и повторно нагревают на водяной бане (см. 5.7) при температуре 75 °С в течение 10 мин, периодически
встряхивая.
Центрифугируют в течение 3 мин, после чего надосадочную жидкость из пробирок А, В добавляют
в пробирки А’, В’к соответствующей надосадочной жидкости, полученной в соответствии с 8.2.2
8.2.4 Объем объединенных экстрактов (пробирки А’, В’) доводят водой примерно до 5 см3 и пере
мешивают.
Полученные экстракты можно хранить в темноте при минус 18 °С в морозильной камере в течение
двух недель.
8.3 Подготовка ионообменных колонок
Обрезают необходимое количество пипеток Пастера (см. 5.9), т. е. две пипетки на образец, таким
образом, чтобы выше конуса сливного отверстия пипетки остался объем 1,2 см3, отверстие закрывают
пробкой из стекловаты (см. 5.8). Пипетки устанавливают вертикально в штативе.
Переносят 0,5 см3 хорошо перемешанной суспензии ионообменной смолы (см. 4.7) в каждую пи
петку и дают отстояться.
Пипетки промывают 2 см3 имидазола формиата (см. 4.4), после чего дважды порциями воды по
1 см3.
8.4 Очистка и десульфирование
8.4.1 Для каждого объединенного экстракта проводят следующие действия:
8.4.2 Переносят 1 см3 экстракта (см. 8.2.4) в подготовленную колонку (см. 8.3), не затрагивая по
верхность смолы, и дают жидкости стечь. Далее приливают две порции ацетатного буфера по 1 см3(см.
4.2), позволяя буферу стекать после каждого добавления.
8.4.3 В колонку вносят 75 мкл разбавленного, очищенного раствора сульфатазы (см. 4.8). Остав
ляют на ночь при комнатной температуре.
4