ГОСТ Р 54035-2010; Страница 14

1. тической колонке С18 (250 мм х 4,6 мм х 5 мкм). При этом соблюдают следующие хроматографические условия:

• подвижная фаза: А — метанол 30 %, Б — вода 70 %;
• градиент до 100 % подвижной фазы А к 10 мин, с 10 до 15 мин — 100% А, с 15 до 23 мин соотноше­ние А/Б—30/70;
• скорость потока подвижной фазы — 1 см3/мин.

2. Порядок элюирования анаболических стероидов и производных стильбена: тренболон (7,0 мин), нортестостерон, транс-диэтилстильбэстрол, этинилэстрадиол, гексестрол, диенэстрол, эстрадиол, тестостерон, метилтестостерон, цисдиэтилстильбэстрол, прогестерон (11,5 мин). Времена удерживания уточняют после предварительногоанализа стандартного раствора концентрации 1 мкг/см3 для каждого аналита при спектрофотометрическом детектировании 254 нм. Время отбора интересую­щей фракции должно быть больше на 1 мин времени удерживания последнего аналита.
3. В положении Load инжектора пропускают через предколонку 0,5 см3 деионизованной воды, а затем водный остаток пробы после ТФЭ очистки. Переводят инжектор в положение Inject и собирают фракцию, соответствующую временам удерживания анаболических стероидов и производных стильбе­на. Полученную фракцию анаболических стероидов и производных стильбена после ВЭЖХ упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 45 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 абсолютного этанола и переносят во флакон вместимостью 4 см3. Упаривают этанол досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре 40 °С.
2. Дериватизация анаболических стероидов и производных стильбена
1. Для получения триметилсилиловых производных анаболических стероидов и производных стильбена к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 50 мм3 раствора МСТФА/ТМИС/ДТЭ (6.3.5). Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60 °С. Реакционную смесь переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа.
2. Для получения пентафторпропионовых производных анаболических стероидов и производ­ных стильбена к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 200 мм3 ацетона и 50 мм3 пентафторпропионового ангидрида. Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60 °С. Реакционную смесь упаривают досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 50 мм3 изооктана, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для анализа.
3. Данный метод дериватизации используют для получения метилоксим/триметилсилиловых (МО/ТМС) производных тренболона и других кетостероидов. При этом к сухому остатку после ВЭЖХ очистки пипеточным дозатором приливают 100 мм3 2 %-ного раствора метоксиламин гидрохлорида в сухом пиридине (6.3.6). Полученную реакционную смесь помещают на нагревательный модуль при тем­пературе 60 °С на 30 мин. По истечении указанного времени реакционную смесь упаривают досуха в токе азота. К сухому остатку добавляют 100 мм3 БСТФАс 1 мм3ТМХС и помещают в нагревательный модуль при температуре 60 °С на 60 мин. Реакционную смесь упаривают досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 50 мм3 изооктана с 5 % реакционной смеси БСТФА/ТМХС, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа.
3. ГХ-МС анализ
1. В инжектор хроматографа вводят от 1 до 5 мм3 пробы и проводят анализ в условиях, указан­ных в 6.5. При этом для каждого образца проводят не менее двух определений.
2. Времена удерживания анаболических стероидов и производных стильбена определяют при анализе градуировочных растворов. Время удерживания идентифицированных анаболических стерои­дов и производных стильбена в анализируемой пробе не должны отличаться от времени удерживания анаболических стероидов и производных стильбена в градуировочном растворе более чем на 2,5 %.

Данные о диагностических ионах дериватов анаболических стероидов и производных стиль­бена указаны в таблице 2.