12
Проверяют приемлемость полученных значений коэффициента отклика Кi для каждого аналита анализируемых градуировочных уровней, используя неравенство
где КГ — максимальное значение i-го коэффициента отклика;
K,m'n — минимальное значение i-го коэффициента отклика;
Ki — среднее значение i-го коэффициента отклика; di — относительная разность коэффициентов отклика.
Значения di (при Р = 0,95) не должны превышать: 5 % (п = 3) или 4 % (п = 2); п — число параллельных определений i-го коэффициента отклика для каждого градуировочного уровня.
- При отсутствии дейтерированных производных анаболических стероидов и производных стильбена используют метод абсолютной градуировки. Образцы для градуировки готовят по 6.4.2, за исключением введения раствора дейтерированных производных.
- Расчеты коэффициента отклика и площади пика выполняют с помощью системы обработки данных в автоматическом режиме.
- Градуировочную характеристику считают приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение квадрата коэффициента корреляции для каждого аналита > 0,98, а значение «Accuracy» для каждой точки градуировочной кривой находится в диапазоне 80 %—120 %.
- Построение новой градуировочной кривой проводят после каждого включения газового хроматографа (остановка работы для сервисного обслуживания или текущей профилактики).
6.5 Условия хроматографических измерений
- Газовый хроматограф с масс-спектрометрическим детектором включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем капиллярных колонок. Например, для кварцевой капиллярной колонки 30 м х 0,25 мм х 0,25 мкм применяют следующие хроматографические условия:
- газ-носитель — гелий;
- скорость потока газа носителя 1 см3/мин;
- температура инжектора 280 °С;
- инжектор в режиме без деления потока;
- температурная программа колонки:
- начальная температура 100 °С в течение 0,5 мин;
- программируемый нагрев от 100 °С до 290 °С со скоростью 8,0 °С/мин;
- изотерма при 290 °С до 40 мин;
- время анализа 40 мин;
- объем пробы от 1 до 5 мм3.
Допускается использование других хроматографических условий, обеспечивающих разделение компонентов пробы.
- Градуировку и настройку масс-спектрометрического детектора в режиме электронной ионизации и тандемной масс-спектрометрии проводят согласно инструкции по эксплуатации прибора.
- Порядок выполнения измерений
- Обработка проб органов, тканей, мочи, желчи животных и кормов
- 100 г мышечной ткани, предварительно очищенной от грубой соединительной ткани, измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на лабораторных весах по 5,0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавляют 15 см3 трис-буфера (6.3.1), 5 мг протеолитического фермента и пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 раствора дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3.
Флаконы закрывают крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на нагревательный модуль с магнитной мешалкой при температуре 55 °С на 3 ч. Затем флаконы с образцами охлаждают до комнатной температуры и приливают 2 см3 соляной кислоты. Гидролизат экстрагируют два раза по 15 см3 метил-трет-бутиловым эфиром, собирая эфирные фракции вотдельный флакон. При неполном отделении метил-трет-бутилового эфира флаконы с образцами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 3 мин. Объединенные эфирные экстракты упаривают на ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 4 см3 метанола, затем приливают 1 см3 деионизованной воды и