ГОСТ Р 54674—2011
5
8.2.2 Окраска по Граму
Из выявленных культур готовят мазки, окрашивают по Граму по ГОСТ 10444.1, ГОСТ ISO 7218,
ГОСТ 30425 (см. 7.3.16) и микроскопируют.
При микроскопировании стафилококки — положительно окрашенные по Граму клетки шарообраз-
ной формы (кокки) диаметром 0,6—1,0 мкм, чаще собранные в гроздья.
8.2.3 Определение каталазы
Определение способности микроорганизмов образовывать каталазу проводят по ГОСТ 30425.
8.2.4 Определение способности коагулировать плазму крови кролика
Способность коагулировать плазму крови кролика определяют у положительно окрашенных по
Граму клеток шарообразной формы, чаще собранных в гроздья и образующих каталазу.
Для определения этой способности микроорганизмов в стерильные пробирки (10 × 75 мм) разли-
вают по 0,5 см
3
разведенной плазмы крови кролика (см. 7.3.19) и вносят в них по петле каждой культуры
(см. 8.1.5). В качестве контроля оставляют одну пробирку с разведенной плазмой и незасеянной культу-
рой. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и инкубируют при температуре (37 ± 2) ºС. Если
через 6 ч коагуляции плазмы не произошло, то пробирки оставляют при температуре (30,0 ± 1,0) ºС на
24 ч или проводят учет результатов после инкубационного периода продолжительностью, установлен-
ной инструкцией по применению плазмы крови кролика.
Допускается реакцию плазмокоагуляции и контроль качества каждой партии плазмы крови кроли-
ка проводить по инструкции по ее применению.
Для ускорения выявления стафилококков используют культуру, выращенную на жидкой среде
(см. 8.1.5) спустя 2 ч после появления видимых признаков роста микроорганизмов. В этом случае к
0,5 см
3
разведенной плазмы крови кролика добавляют две капли бульонной культуры (см. 8.1.5). В ка-
честве контроля в одну пробирку с разведенной плазмой и незасеянной культурой вносят 0,1 см
3
сте-
рильного мясо-пептонного бульона (см. 7.3.4). Учет результатов проводят в течение от 30 мин до 2—4 ч.
Реакцию считают отрицательной и оценивают:
- при отсутствии свертывания плазмы как «–»; -
появлении отдельных нитей как «+».
При отсутствии свертывания крови кролика или появлении отдельных нитей через указанное вре-
мя исследуемую культуру микроорганизмов относят к коагулазоотрицательной.
Реакцию считают положительной и оценивают:
- при образовании небольшого сформировавшегося компактного сгустка как «++»;
- образовании большого компактного сгустка как «+++»;
- скоагулированиии всей плазмы (сгусток не меняет своего положения при переворачивании про-
бирки) как «++++».
При положительной реакции коагуляции плазмы крови кролика (образовании фибрина) исследуе-
мую культуру микроорганизмов относят к коагулазоположительной.
8.2.5 Подтверждение принадлежности микроорганизмов, выросших на агаризованной среде с
кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном (см. 7.3.6), к коагулазоположительным стафилококкам
устанавливают по типичным колониям (см. 8.1.3) без определения биохимических свойств.
8.2.6 Подтверждение принадлежности выявленных коагулазоположительных стафилокок-
ков к S. aureus
8.2.6.1 Определение образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауера)
Для определения способности выявленных коагулазоположительных стафилококков образовы-
вать ацетоин по полной петле агаровой испытуемой культуры (см. 8.1.5) засевают в пробирки со сре-
дой Кларка (см. 7.3.11) и инкубируют посевы при температуре (37 ± 1) ºС в течение (24 ± 2) ч. После
инкубации в стерильную пробирку отбирают 1 см
3
культуральной жидкости и прибавляют к ней 0,6 см
3
спиртового раствора α-нафтола (см. 7.3.14) и 0,2 см
3
раствора гидроокиси калия (см. 7.3.15). После
прибавления каждого реактива содержимое пробирки встряхивают. Появление через 15—60 мин от
розового до светло-красного окрашивания указывает на положительную реакцию. При отрицательной
реакции остаток культуральной среды инкубируют при температуре (37 ± 1) ºС еще в течение (24 ± 2) ч
и тест повторяют.
8.2.6.2 Определение ферментации мальтозы в аэробных условиях
Для определения способности выявленных коагулазоположительных стафилококков ферменти-
ровать мальтозу в аэробных условиях используют среду Гисса с мальтозой (см. 7.3.13). Испытуемую
чистую культуру (см. 8.1.5) засевают уколом петлей в пробирки с этой средой и инкубируют посевы при
температуре (37 ± 1) ºС в течение 48 ч.