ГОСТ Р 54674—2011
8 Проведение испытаний
8.1 Выявление S. aureus
8.1.1 Для выявления S. aureus анализируемую пробу продукта или ее эквивалентное разведение
вносят в одну из жидких селективных сред: солевой или сахарный бульон (см. 7.3.2, 7.3.3).
Исходное разведение в количестве 1 см
3
(0,1 г продукта) вносят в 10 см
3
среды нормальной кон-
центрации или исходное разведение в количестве 10 см
3
(1 г продукта) — в 10 см
3
среды двойной
концентрации.
Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведения и жидкой селектив-
ной средой (см. 7.3.2, 7.3.3) нормальной концентрации 1:10, двойной концентрации 1:1.
При испытании продукта с большим содержанием хлористого натрия (NaCl) солевой бульон для
посева не используют. Массовая концентрация хлористого натрия в посевах не должна быть более
6,5 % — 7,0 %.
Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) ºС в течение (24 ± 2) ч. Если помутнения бульона
нет, то инкубируют еще (24 ± 2) ч.
В солевом или сахарном бульоне стафилококки растут со стабильным равномерным помутнени-
ем среды, формируя компактный, легко суспендируемый осадок.
8.1.2 Для получения изолированных колоний из каждой пробирки с посевами (см. 8.1.1) бактери-
ологической петлей проводят высев штрихом по ГОСТ 26670 на поверхность чашек Петри с одной из
агаризованных селективно-диагностических сред: Байрд-Паркер агар (см. 7.3.5), агаризованная среда с
кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном (см. 7.3.6), яично-желточный солевой агар (см.7.3.8),
яично-желточный азидный агар (см. 7.3.9).
При предполагаемом присутствии в анализируемой пробе продукта бактерий рода Proteus или
сильно обсемененной пробы используют агаризованную среду Байрд-Паркер, содержащую сульфаме-
тазин (см. 7.3.7).
Чашки Петри с посевами переворачивают вверх дном, помещают в термостат и инкубируют
при температуре (37 ± 1) ºС в течение (24 ± 2) ч. Предварительный учет результатов проводят через
(24 ± 2) ч, окончательный — через (48 ± 2) ч.
8.1.3 После инкубирования проводят просмотр чашек Петри на присутствие типичных и (или)
предполагаемых колоний.
На агаризованной среде Байрд-Паркера (см. 7.3.5) стафилококки после (48 ± 2) ч инкубирования
растут в виде черных или серых блестящих выпуклых колоний диаметром 1—1,5 мм (до 1—3 мм), окру-
женных зоной лецитиназной активности в виде просветления среды вокруг них, иногда с узкой белой
кромкой. Через (24 ± 2) ч инкубирования в прозрачной зоне может появиться узкое опалесцирующее
кольцо, окружающее колонию.
На агаризованной среде с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном (см. 7.3.6) стафилококки
растут в виде черных, серых и белых мелких колоний, окруженных зоной преципитации, указывающей
на коагулазную активность.
На готовой питательной среде (см. 7.3.7) с сульфаметазином стафилококки растут в виде серо-
черных, блестящих выпуклых колоний. Бактерии рода Proteus обычно не растут или дают слабый рост в
виде коричнево-черных колоний без роения.
На яично-желточном-солевом (см. 7.3.8) и яично-желточном-азидном агарах (см. 7.3.9) стафило-
кокки растут в виде колоний белого и желтого (различных оттенков) цветов с образованием вокруг них
зоны лецитиназной активности.
8.1.4 Отобранные типичные и (или) предполагаемые колонии отмечают на дне чашки Петри для
выделения чистой культуры и проведения идентификации.
8.1.5 Приготовление чистой культуры
Из каждой отобранной колонии (см. 8.1.4) проводят пересев культуры в жидкую селективную
среду (см. 7.3.2, 7.3.3) и на поверхность скошенного мясо-пептонного агара (см. 7.3.4) или ГРМ-агара
(см. 7.3.10). Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) ºС в течение (24 ± 2) ч. Готовят мазки, окра-
шивают по Граму, микроскопируют и по ним проверяют чистоту выделенной культуры.
8.2 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов к S.aureus
4
8.2.1 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов к S. aureus определяют по
отношению к окраске по Граму и способности образовывать каталазу, ацетоин, коагулировать плазму
крови кролика и ферментировать мальтозу в аэробных и маннит в анаэробных условиях.