ГОСТ Р 54635―2011
8.3 Подготовка жидкостного хроматографа
Подготовку жидкостного хроматографа к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по
эксплуатации оборудования. Перед началом работы колонку промывают элюентом.
8.4 Построение градуировочной зависимости
гр
Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством
по эксплуатации оборудования. Проводят хроматографический анализ всех градуировочных раство-
ров, приготовленных по 8.1.2.
Градуировочный график строят в координатах «аналитический сигнал» — «массовая концентра-
ция витамина в градуировочном растворе, мкг/см
3
». Для каждого анализируемого градуировочного рас-
твора проводят два параллельных измерения и находят среднее арифметическое значение. Различие
между измеренными значениями аналитических сигналов и времени удерживания не должно превы-
шать 5 % от средних значений. Линейные участки градуировочного графика должны соответствовать
всему диапазону определяемых массовых концентраций витамина А.
Коэффициент градуировочного графика k , мкг/см
3
/(mAU · c) или мкг/см
3
/(AU · c), определяют как
среднеарифметическое значение коэффициентов k
i
, вычисляемых по формуле
S
k
i
=
C
i
,
(3)
i
i
i
где С — массовая концентрация стандартных веществ в i-м градуировочном растворе, мкг/см
3
;
S — площадь (высота) аналитического сигнала при анализе i-го градуировочного раствора, mAU · c
(AU · c), или высота пика, мм.
Правильность построения градуировочной зависимости контролируется значением достоверной
аппроксимации R
2
≥ 0,997.
Градуировка проводится в следующих случаях: на этапе освоения метода, при изменении усло-
вий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям
результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.
9 Выполнение измерений
гр
В колонку хроматографа последовательно вводят равные объемы испытуемого и градуировочно-
го растворов. В качестве градуировочного выбирают раствор, высота пика которого наименее отлича-
ется от высоты пика испытуемого раствора. Концентрацию витамина А (С ) в растворе, используемом
для градуировки, уточняют в день его использования по 8.1.2.
Для идентификации пиков сопоставляют время удерживания ретинола (или ретинола ацетата,
или ретинола пальмитата) испытуемого раствора и раствора стандарта, а также добавляют к испытуе-
мому раствору раствор стандарта с близким содержанием витамина А.
10 Обработка и оформление результатов
Массовую долю витамина А X, млн
–1
, вычисляют по формулам:
m
X
=
k
г
р
×
S
обр
×
V
,
(4)
гр
обр
где k — коэффициент градуировочного графика по 8.4;
S— среднеарифметическое значение результатов измерений площади (высоты) пика анализиру-
емого компонента для двух параллельных хроматографических анализов испытуемого рас-
твора, mAU · c (AU · c), или высота пика, мм;
V — объем разведения, см
3
;
m — масса анализируемой пробы, г.
С использованием градуировочного раствора
7
S
×
m
X
=
C
г
р
×
S
обр
×
V
,
(5)
г
р
где С
гр
—
массовая
концентрация
градуировочного
раствора,
мкг/см
3
;