ГОСТ 12044-93
10.1.3.2Для стимуляции образования конндиеиосцев и конидий с целью идентификации патоге
нов некоторых грибов, например DrechsJeragraminea (полосатая пятнистость), Dr. teres(сетчатая пятни
стость), Fusarium nivale (снежная плесень) и др., необходимо 12 ч чередование света и темноты
при проращивании семян в чашках Петри, Коха или стеклянных стаканах с фильтровальной
бумагой (освещенность 750—1250люкс).
10.2.Анализ семян на питательных средах
10.2.1 Отбор проб
10.2.1.1. Из средней пробы, предназначенной для определения зараженности, выделяют навес
ку семян основной культуры, из которой отбирают четыре рабочие пробы по 50 семяи в каждой и
помешают их в стерильную посуду с питательной средой.
10.2.2 Подготовка к анализу
10.2.2.1 Приготовление картофельного агара:
200 г вымытого, очищенного, нарезанного ломтиками картофеля заливают 1000 см3 воды и
кипятят в течение 40 мин, затем жидкость фильтруют. В отфильтрованную жидкость доливают воду до
1000 см3, добавляют 20 г агара и подогревают до его полного растворения. После растворения
агара раствор фильтруют в горячем состоянии через несколько слоев марли с ватной прокладкой
и стерилизуют под даалением 0,09807 МПа (1 атм) в течение 30 мин или текучим паром два раза по
1ч через сутки. После стерилизации в питательную среду добавляют стерильный 50 %-ный раствор
лимонной кислоты из расчета 0.1—0.05 см5(одна капля) на 10 см3или концентрированную молоч
ную кислоту (4 см’ кислоты на 1000 см’ среды) и жидкость рахтивают по чашкам.
10.2.2.2 Приготовление картофельно-глюкозного агара:
На 1дм3приготовленного агара (10.2.2.1) перед стерилизацией добавляют 20—30 г глюкозы, а
после стерилизации лимонную или молочную кислоту (10.2.2.1).
10.2.2.3 Приготовление среды из сухого агара Чапека
На 1дм3берут 45—50 г сухого агара Чапека и стерилизуют под даалением 0.09807 МПа (1 атм)
в течение 30 мин.
10.2.2.4 Стерилизация питательных сред
Стерилизацию питательных сред проводят в автоклаве под дадтеннем, без давления (текучим
паром) или в кипятильнике.
Питательные среды без глюкозы стерилизуют под давлением 0.09807 МПа (I атм) в течение
30 мин, питательные среды с глюкозой стерилизуют под даатением 0,04904 МПа (0,5 атм) в тече
ние 25 мин.
Стерилизацию питательных сред текучим паром проводят в два приема по 1ч через сутки.
В перерыве между первым и вторым приемами стерилизуемые жидкости держат при температуре
25 *С - 30 *С.
10.2.3 Проведение анализа
10.2.3.1 Встерильные чашки Петри диаметром 9,5—10см наливают 10 см3простерилизованно-
го агара. Толщина слоя среды в чашке Петри должна быть 3—4 мм. Разливку питательных сред в
чашки и закладку семян проводят в бактериологической камере (стерильном боксе). Раскладку
се мян проводят на застывшую питательную среду пинцетом, периодически стерилизуя его
обжигани ем на спиртовке.
10.2.3.2 Семена промывают струей воды под водопроводным краном в течение 1—2 ч и дезин
фицируют 1 %-ны.м раствором марганцовокислого калия или 0.1 %-Ны.м раствором азотнокислого
серебра, или 96 %-ным спиртом в течение 1—2 мин. Затем семена промывают в стерильной или
прокипяченной воде и просушивают между листами стерильной фильтровальной бумаги. Семена
помешают в чашки Петри по 10—25 шт. в зависимости от культуры и ставят их для проращивания в
термостат при температуре 22 "С —25 ’С. Проращивание семян проводят в течение срока, указанно го
для определения всхожести семян по ГОСТ 12038.
10.2.3.3 Для контроля правильности определения болезней при просмотре семян небольшую
часть развившейся колонии исследуют в капле воды под микроскопом.
10.3Анализ семян в рулонах фильтровальной бумаги
10.3.1 Отбор проб - по 10.1.1.1.
10.3.2 Проведение анализа
10.3.2.1Для проращивания семян используют два слоя увлажненной до полной влагоемкости
фильтровальной бумаги.
8
162