С. 6 ГОСТ 26573.1-93
Электронная версия
Калия гидроокись по ГОСТ 24363.
Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.
Гексан по ТУ 6-09-3375, ч.
Спирт изопропиловый по ТУ 6—09—402.
Пирогаллол А по ТУ 6-09—5319.
Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166.
Алюминия окись, нейтральная по ТУ 6—09—3916.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Ретинола ацетат в .масле, 3.44 %-ный раствор с активностью 90000—110000 МЕ/см3 по
фармакопее.
Бумага универсальная индикаторная по ТУ 6—09—1182.
Фильтры бумажные обеззоленные (красная лента) по ТУ 6—09—1678.
Марля медицинская по ГОСТ 9412.
П рим еч ан ие. При проведении испытаний допускается использовать импортные аппаратуру, мате
риалы и реактивы с характеристиками нс ниже отечественных аналогов.
3.2.Под гот овк а к исп ыт а ни ю
3.2.1. Определение активности витамина А в масляном препарате —по п. 2.2.5.
3.2.2. Приготовление стандартногораствора витамина А
Для приготовления стандартного раствора взвешивают навеску масляного препарата витамина
А (3.44 %-ный раствор), необходимую для получения 25 см3 раствора с активностью 10000 ME.
Навеску помешают в мерную колбу вместимостью 25 см3, растворяют в изопропиловом спирте,
перемешивают и доводят этим спиртом до метки.
Хранят в холодильнике и используют в течение недели.
3.2.3. Подготовка растворителей
Очистку растворителей, применяемых в хроматографии, проводят посредством перегонки,
отбрасывая первую и последнюю фракции в количестве */ю от первоначального объема, или
пропусканием через колонку, заполненную активированной окисью алюминия. Окись алюминия
активируют при нагревании в течение 1ч при температуре 400—450 "С. Колонку высотой 60—80 см
и диаметром 2—4 см заполняют 80 г активированной окиси алюминия и пропускают через нее 700
см3 растворителя. Для проверки чистоты в колонку жидкостного хроматографа загружают 50 мкл
растворителя. В случае его загрязнения на хроматограмме появляются пики, соответствую щие
времени удерживания витамина А.
3.2.4. Приготовление спиртовогораствори гидроокиси калин с массовой долей 10 %
Растворяют 20 г гидроокиси калия в 180 см3 этилового спирта. Раствор готовят непосредст
венно перед испытанием.
3.2.5. Подготовка жидкостногохроматографа к работе
Подготовка хроматографа и колонки к работе проводится согласно описанию, данному в
инструкции к прибору. Элюент представляет собой смесь гексана с этанолом в объемном соотно
шении 99.5:0.5. Применяют стеклянную колонку высотой 150 мм и диаметром 3 мм, заполненную
сорбентом «Сепарон-SGX* с зернением 7 мкм. Скорость элюирования 1,4—1,6 см3/мнн при
комнатной температуре. Фотометрический детектор с длиной волны пропускаемого света 254 нм.
Перед началом измерений хроматограф прогревают 15 мин и параллельно колонку промывают
элюентом до установления постоянства нулевой линии и времени удерживания витамина А.
проверяемого по стандартному раствору.
При использовании хроматографов других марок подбирают оптимальные условия для хрома
тографирования (объем пробы, скорость элюирования).
3.3. Проведен ие испыт ания
В коническую колбу вместимостью 250 см3, снабженную обратным холодильником, помещают
5—10 г премикса (в зависимости от рецепта премикса), добавляют 50 см3 10 %-ного спиртового
раствора гидроокиси катия, на конце скальпеля-пирогаллол, помешают на водяную баню и
омыляют при температуре 80—85 *С в течение 30 мин. Содержимое колбы охлаждают до
комнатной температуры под струей холодной воды, добавляют 50 см3 дистиллированной поды и
50 см3 гексана, дают отстояться и осторожно сливают верхний гексановый слой в делительную
воронку. Экстра кцию раствора в колбе повторяют дважды порциями по 40 см3 гексана,
последнюю фракцию фильтруют через воронку с марлевым слоем. Объединенные гексановые
вытяжки промывают в
44