С. 2 ГОСТ 26573.1-93
Электронная версия
Холодильник ХПТ-1—100—18 ХС по ГОСТ 25336.
Насос водоструйный по ГОСТ 25336.
Бюретка 6—2—2 (исполнения 6. 2-го класса точности, вместимостью 2 см3).
Склянки с притертой пробкой.
Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.
Спирт этиловый абсолютированный по ТУ 84—11—99.
Спирт изопропиловый (пропанол-2), х. ч., по ТУ 6—09—402.
Спирт пропиловый (пропанол-1), х. ч., по МРТУ 6—09—6628.
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, х. ч., по ТУ 6—09—06—1092.
Ретинола ацетат в масле. 3.44 %-ный раствор с активностью 90000—110000 МЕ/см3 по
фармакопее.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
П р и м е ч а н и е . При проведении
испытаний
допускается испольювать импортные аппаратуру, мате
риалы и реактивы с характеристиками не ниже отечественных аналогов.
2.2.П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю
2.2.1. Приготовление элюента для х/юматографии
Трехкомпопентный эдюент готовят смешиванием пропилового спирта, дистиллированной
воды и ацетонитрила в соотношении 50:8:42 (% об.). Для этого в склянку вместимостью 1000 см3
вносят цилиндром 500 см3пропилового спирта. 420 см3 ацетонитрила и 80 см3дистиллированной
воды.
Приготовленную смесь растворителей фильтруют через стеклянный фильтр для удаления
возможных механических примесей и пузырьков воздуха и помешают в стеклянный сосуд с
притертой пробкой. Полученный раствор можно хранить в течение 1мес.
2.2.2. Подготовке хроматографической колонки
При работе на неиспользованной ранее колонке или колонке, которая не была подключена к
прибору «Милихром*. из нее следует удалить воздух и тщательно промыть элюептом до получения
стабильной нулевой линии. Для этого через колонку пропускают элюент в количестве 20—30
свободных объемов колонки, т. е. два полных шприца насоса хроматографа при расходе элюента
сначала 50 мкдм3/мии, а затем 100 мкдм3/мин. Промывку колонки заканчивают при получении
стабильной нулевой линии.
После промывки колонки проводят ее насыщение витамином А. Для этого выполняют 7—10
анализов наиболее концентрированного градуировочного раствора витамина А. Насыщение колон
ки прекращают, когда отношение разности между двумя последовательными определениями
концентрации витамина А к среднему арифметическому значению этих операций не превышает 3
% отн.
При правильной эксплуатации колонка выдерживает до 500—600 анализов.
2.2.3. Приготовление растворителя для экстракции витамина А из премикса
Для экстракции витамина А из премиксов используют двухкомпонентный экстрагент состава:
изопропиловый спирт и дистиллированная вода в соотношении 97:3 (% об.). Для этого в мерную
колбу вместимостью 1000 см3 вносят пипеткой 30 см3дистиллированной волы и доводят до метки
изопропиловым спиртом. Хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой.
2.2.4. Приготовление абсолютного этилового спирта
К этиловому ректификованному спирту прибавляют в соотношении 4:1 свежепрокаленную
при температуре 800—1000 *С в течение 2 ч окись кальция. Смесь кипятят с обратным холодиль
ником в течение 2—3 ч. Затем смесь перегоняют, отбрасывая начальную и конечную порции отгона
(по 20—30 см3). Перегнанный абсолютный спирт при измерении на спектрофотометре относитель
но дистиллированной волы в кювете с толщиной слоя 1 см должен иметь значение оптической
плолгости. не превышающее 0.01 единиц в области 320—350 нм и 0.05 при 280—300 нм.
Если спирт не отвечает вышеуказанным требованиям, процесс обезвоживания повторяют.
Этиловый абсолютный спирт промышленного изготоатения перегоняют над твердой гидроо
кисью натрия или калия (К) г шелочи на 1дм3спирта) и проверяют, как указано выше.
2.2.5. Определение активности витамина Л в масляном препарате
0,1 г масляного препарата витамина А растворяют в абсолютном этиловом спирте в мерной
колбе вместимостью 50 см3, перемешивают. Отбирают 1см3раствора в колбу вместимостью 50 см3,
40