Электронная версия
ГОСТ 26573.1-93 С. 3
заполняют ее до метки абсолютным спиртом и измеряют оптическую плотность раствора на
спектрофотометре в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм при длине волны 326 нм. В
качестве контрольного раствора используется абсолютный спирт.
Активность витамина А (Л) в международных единицах (ME) в 1 г препарата вычисляют по
формуле
D V,-
К
-
1880
m V 100•
где D— оптическая плотность раствора при длине волны 326 нм;
V,, V, — первое и второе разведения, см5;
1880 — коэффициент перевода в ME;
т — масса навески масляного препарата, г;
V— объем раствора, используемый для второго разведения, см’;
100 — коэффициент.
2.2.6. Построение градуировочного графика
Для приготовления стандартного раствора взвешивают навеску масляного препарата витамина
А (3,44 %-ный раствор), необходимую для получения раствора с активностью 30000 ME в 50 см3
или 600 МЕ/см3. Навеску помешают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растпоряют в изопро
пиловом спирте, перемешивают и доводят этим спиртом до метки.
Раствор хранят в холодильнике и используют в течение одной недели.
Из этого раствора готовят градуировочные (рабочие) растворы. Для премиксов, содержащих
витамин А в количестве от ИЮМЕ/г и выше, готовят рабочие растворы с содержанием 120. 300.
600. 1200. 3000. 6000. 12000 ME витамина в 25 см3. Дтя этого берут соответственно, 0.2; 0,5; 1,0;
2,0; 5,0; 10.0; 20.0 см3 исходного раствора, помещают в мерные колбы вместимостью 25 см3 и
доводят до метки изопропиловым спиртом.
Для премиксов, содержащих витамин Л в количестве 20—100 МЕ/г, готовят рабочие растворы
с содержанием 20. 40. 60, 90. 120 ME в 25 см3. Дтя этого берут соответственно 0,033; 0.066; 0,1; 0,15;
0,2 см3 исходного раствора, помещают в мерные колбы вместимостью 25 см3 при помощи микро-
бюретки и доводят до метки изопропиловым спиртом.
Срок годности растворов —не более 1месприхранении вхолодильнике при температуре 4—10 ’С.
Полученные рабочие растворы анализируют на жидкостном хроматографе «Милихром* при
следующих условиях:
хроматографическая колонка 2 х 64 мм (2 х 80 мм), (2 х 120 мм);
сорбент —Силасорб C,s; Силасорб SPHC)S; Сепарон C1S;
трехкомпонентный элюент на основе ацетонитрила;
объем пробы —6 мкдм3;
длина волны —328 нм;
постоянная времени —0.2 с;
скорость подачи элюента— 150 мкдм3/мин.
Удерживаемый объем пика витамина А составляет 300—360 мкдм3(может меняться в зависи
мости от длины колонки).
Каждый раствор хроматографируют три раза. После выхода пика колонку промывают, прока
чивая через нее 100—200 мкдм3 элюента до выхода на нулевую линию.
Значение средних высот хроматографических пиков, выраженное в единицах оптической
плотности (е. о. и.), откладывают по оси ординат градуировочного графика, а по оси абсцисс —
значение активности витамина А в 25 см3 раствора. Дтя концентраций витамина А 120-10000 и
20—120 МЕ/г градуировочные графики строят отдельно.
Градуировочный график строят также, откладывая по оси ординат средние высоты хромато
графических пиков (А), выраженные в единицах длины (мм) с учетом чувствительности прибора. В
этом случае содержание витамина в пробе определяют, измеряя высоту’ соответствующего хрома
тографического пика линейкой.
Пример хроматограммы представлен на черт. I.
Построение градуировочных графиков можно заменить расчетом коэффициентов наклона (К)
по формуле
41