ГОСТ 23683—2021
гексанового слоя снова проводят экстракцию 50 см3 смеси диметилформамида и воды. Гексановый слой отбра
сывают, объединенный в плоскодонной колбе диметилформамидный экстракт переносят в делительную воронку,
добавляют 100 см3 дистиллированной воды и проводят экстракцию из водной фазы гексаном трижды по 50 см3.
Водную фазу отбрасывают, а гексановый экстракт промывают водой трижды по 30 см3, переносят в плоскодонную
колбу, добавляют 10 г безводного сульфата натрия и выдерживают в течение одного часа,
н
-Гексан упаривают
на ротационном испарителе до объема 1,5—2,0 см3, оставшийся растворитель удаляют потоком воздуха через
вакуумный алонж, соединенный с водоструйным насосом, остаток в колбе растворяют в 0,5 см3этилового спирта.
В стакан вместимостью 100 см3 отвешивают (2,5 ± 0,2) г сефадекса LH-20, добавляют 20 см3 этилового
спирта и оставляют для набухания на 3—4 ч. Затем гель переносят, смывая небольшим количеством спирта, в
стеклянную хроматографическую колонку, дают растворителю стечь таким образом, чтобы слой спирта над слоем
сорбента оставался не ниже 2 мм. На подготовленную колонку наносят пипеткой остаток экстракта из колбы, триж
ды смывая его из колбы этиловым спиртом порциями по 0,5 см3. Элюирование из колонки полициклических арома
тических углеводородов, в том числе бенз(а)пирена, проводят 40 см3этилового спирта, первую фракцию объемом
12 см3отбрасывают, собирают вторую фракцию объемом 25 см3. Скорость элюирования растворителя 0,5 см3/мин
обеспечивают, создавая небольшое избыточное давление потоком воздуха или азота через насадку, соединенную
с воздуходувкой или газовым баллоном. Газ следует подавать через стеклянную трубку, заполненную силикагелем.
Допускается повторно использовать колонку с сефадексом LH-20. Для повторного использования, не допу
ская высыхания сорбента после фракционирования, промывают колонку 25 см3 этилового спирта и наносят сле
дующую пробу. Для хранения необходимо заполнить колонку этиловым спиртом, закупорить колонку пробкой и не
допускать высыхания сорбента. В случае высыхания сефадекса LH-20 рекомендуется приготовить новую колонку.
Переносят раствор второй фракции в грушевидную колбу вместимостью 50 см3, растворитель упаривают до
объема 0,5—1,0 см3, его остаток удаляют в потоке воздуха или азота.
Полученную фракцию, содержащую бенз(а)пирен, далее анализируют с помощью высокоэффективной жид
костной хроматографии или спектрофлуориметрическим методом.
Одновременно проводят контрольный опыт, проводя все стадии испытания с использованием реактивов со
гласно методике, но без навески продукта.
В.3.2Определениесодержаниябенз(а)пиренаметодомвысокоэффективнойжидкостной
хроматографии
В.3.2.1 Условия хроматографии
Условия хроматографии подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа и хро
матографической колонки.
В качестве примера приведены следующие условия хроматографического определения бенз(а)пирена.
Жидкостный хроматограф с флуоресцентным детектором.
Колонка зернением 5 мк, длиной 150 мм, диаметром — 4,6 мм.
Флуориметрический детектор: длина волны возбуждающего света 300 нм, эмиссионный фильтр — 418 нм.
Подвижная фаза: ацетонитрил и вода в объемном соотношении 8:2.
Скорость элюирования — 2,0 см3/мин.
Объем вводимой пробы — 20 мкл.
Чувствительность усилителя подбирают таким образом, чтобы интенсивность сигналов бенз(а)пирена и вну
треннего стандарта — бенз(Ь)хризена не превышала 95 % шкалы.
Время испытания — 15 мин; время удерживания бенз(а)пирена — 5 мин, бенз(Ь)хризена — 13 мин.
Анализируемые растворы хроматографируют дважды в одинаковых условиях. Площади пиков измеряют с
помощью программного обеспечения или вручную: как произведение высоты пика и его ширины на половине вы
соты.
Определяют содержание бенз(а)пирена методом внутреннего стандарта или методом добавок.
В.3.2.2 Определение содержания бенз(а)пирена в растворе (экстракте), полученном по В.3.1, методом вну
треннего стандарта
При использовании такого метода количественной оценки предварительно проводят градуировку хромато
графа, используя градуировочные растворы, приготовленные по В.2.5.
В условиях, указанных в В.3.2.1, записывают по три хроматограммы для каждого из приготовленных раство
ров и измеряют площади пиков бенз(а)пирена и бенз(Ь)хризена. Определяют среднеарифметическое значение
площади пиков бенз(а)пирена и бенз(Ь)хризена, рассчитанное по трем хроматограммам.
Вычисляют градуировочный коэффициент по формуле
K = myS2
m2-S\’
(В-2)
где
т^\лт2
—
массы введенных в хроматограф бенз(а)пирена (
т
.,) и бенз(Ь)хризена (
т
2), мкг;
S1и S2 —
площади пиков бенз(а)пирена S1и бенз(Ь)хризена S2, см3.
Рассчитывают градуировочный коэффициент К для каждого раствора.
15