ГОСТ Р 51938-2002
выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора —
(Л,)
относительно оптической
плотности воздуха.
7.2.4 Раствор пробы, применяемый при определении обшей глюкозы
В фотометрическую кювету вносят 0.20 см3 нитратного буферного раствора по 5.3. 0,1 см3
подготовленной пробы по 7.1.1 и 0.02 см3 раствора ФЗ по 5.4. Растворы перемешивают, осторожно
встряхивая кювету, затем выдерживают 15 мин. В кювету вносят 1,00 см3 буферного раствора
триэтаноламингилрохлорида по 5.5, 0,10 см3 раствора НАДО по 5.6, 0.10 см3 раствора АТФ по
5.7 и 1,60 см ’дистиллированной воды. Растворы перемешивают пластиковым шпателем или
стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора —(Л3)
относительно оптической плотности воздуха.
7.2.5 Раствор пробы, применяемый при определении свободной глюкозы
В фотометрическую кювету вносят 0,1 см3 подготовленной пробы по 7.1.1. 1,00 см3буферного
раствора триэтаноламингилрохлорида по 5.5. 0,10 см3 раствора НАДФ по 5.6, 0.10 см3 раствора АТФ
по 5.7 и 1,82 см3 дистиллированной поды. Растворы перемешивают пластиковым шпателем или
стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора —(Л4)
относительно оптической плотности воздуха.
7.2.6 Раствор пробы, из которой удалена глюкоза, применяемый при определении общей
глюкозы
Контрольный раствор готовят по 7.2.2. Опытный раствор готовят по следующей методике.
В фотометрическую кювету вносят 0,20 см3 нитратного буферного раствора по 5.3, 0,1 см3
подготовленной пробы по 7.1.2 и 0,02 см3 раствора ФЗ по 5.4. Растворы перемешивают, осторожно
встряхивая кювету, затем выдерживают 15 мин. В кювету вносят 1,00 см3 буферного раствора
триэтаноламингилрохлорида по 5.5, 0,10 см3 раствора НАДФ по 5.6. 0,10 см3 раствора АТФ по
5.7 и 1.60 см3дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или
стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора —(Л5)
относительно оптической плотности воздуха.
7.2.7 Ферментативная реакция и количественное определение
Каждый из подготовленных растворов по 7.2.2, 7.2.3. 7.2.4, 7.2.5 и 7.2.6 используют для
определения сахарозы по следующей методике.
В кюветы вносят по 0,02 см3 суспензии ГК и Г6Ф-ДГ по 5.8. перемешивают пластиковым
шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают от 10 до 15 мин. Затем измеряют оптические
плотности растворов —(Ль —раствора, подготовленного по 7.2.2, Л7 —по 7.2.3, As —по 7.2.4, Л9 —
по 7.2.5 и
Аи)
—по 7.2.6) относительно оптической плотности воздуха.
Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через
2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптическая плотность растворов
увеличивается с течением времени, то окончательное значение оптической плотности определяют
методом экстраполяции на момент внесения суспензии ферментов ГК и Г6Ф-ДГ по 5.8.
П р и мсча н и с — При появлении побочных, так называемых «медленнотекущих», реакций расчет
окончательных значений оптической плотности проводят по методике, приведенной в приложении Б.
8 Выражение результатов
Вычисляют изменение оптической плотности исследуемого раствора пробы, вызванное при
сутствием гидролизованной сахарозы А4сах. по разности измеренных величин оптических плотнос
тей растворов, полученных при определении общей глюкозыГ1и свободной глюкозы Д/1св м.
ЬЛслх = М й ш . гл - М » . г...<4>
М>6щ.
1
я =_ >Ь) ~~ Л)»
М :». гл " Ц , “ Л4) - (Л7 - Л2).(6)
Если определение сахарозы проводилось в пробе, подготовленной по 7.1.2. расчет оптической
плотности ДАсах проводят по следующей формуле
М :ах = М .о - 4 ) - (Л - Л |).
(7)
5