ГОСТ I»51938-2002
Г-6-Ф— глюкозо-6-фосфат;
ГК— гексокиназа;
Г6Ф-ДГ — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;
ФЗ— {З-фруктозидаза;
Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, кото
рый служит катализатором для превращения I мкмоля вещества в минуту при 25 ’С.
4 Сущность метода
4.1 Сущность метода
В основе метода 11. 2. 3| лежит реакция ферментативного гидролиза сахарозы с помощью ФЗ
с образованием равных количеств D-глюкозы и D-фруктозы. В последующей реакции, катализируе
мой ферментом ГК с участием АТФ, D-глкжоза (общая глюкоза), которая образовалась при
гидролизе сахарозы и D-глюкоза, содержащаяся висходной пробе (свободная глюкоза), подвергается
фосфорилированию по шестому атому углерода с образованием Г-6-Ф. Под действием НЛДФ Г-6-Ф
в присутствии Г6Ф-ДГ преобразуется в гдюконат-6-фосфат и НЛДФН. Массовая концентрация
образовавшегося НЛДФН эквивалентна массовой концентрации преобразованной D-глюкозы (4.2).
Количественное измерение НЛДФН осуществляется спектрофотометром (фотометром).
Массовая концентрация сахарозы пропорциональна разности оптических плотностей раство
ров НЛДФН, полученных преобразованием исходной пробы (свободная глюкоза) и пробы, в которой
проведен ферментативный гидролиз сахарозы (общая глюкоза).
В соках, нектарах и сокосодержашнх напитках с низкой массовой концентрацией сахарозы —
менее 5 г/дм3 (содержание сахарозы в природных фруктовых и овощных соках приведено в
приложении А) и высокой массовой концентрацией D-глюкозы перед количественным определе
нием сахарозы проводят йодное окисление избытка глюкозы в щелочной среде.
4.2 Реакции, происходящие при определении сахарозы
ФЗ
Сахароза + Н20 ----------> D-глюкоза + D-фруктоза(I)
ГК
D-глюкоза + АТФ---------->Г-6-Ф + ЛДФ(2)
Г6Ф-ДГ
Г-6-Ф + НАДФ ’
------------
» глюконат-6-фосфат + НЛДФН + Н*(3)
5 Реактивы
5.1 Общие требования
При проведении анализа используют реактивы х.ч. или ч.д.а и дистиллированную воду по
ГОСТ 6709.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения
сахарозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.
Препараты триэтаноламингидрохлорида, динатриевой соли р-никотинамидадениндинукле
отидфосфата ф-НАДФ-№2)
и
динатриевой соли аденозни-5’-трнфосфата (АТФ-!ч‘а2Н2 к ЗН20)
должны содержать не менее 90 % основного вещества.
5.2 Растворы гидроокиси натрия
Готовят растворы гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярных концентраций с (NaOH) =
=5 моль/дм3, с (NaON) = 4 моль/дм3 и с (NaON) = 2 моль/дм3.
5.3 Цитратный буферный раствор активной кислотностью 4,6 pH
Растворяют 6,9 г моногидрата лимонной кислоты (С6Нн0 7х Н,0) по ГОСТ 3652 и 9.1 г
дигидрата натрия лимоннокислого трехзамещенного (C6H5Na30 7
х
2Н20) 11| в 150 см3дистиллиро
ванной воды. Доводят активную кислотность раствора до 4.6 pH, добавляя раствор гидроокиси
натрия с (NaON) = 2 моль/дм3 по 5.2. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 200 см3.
Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С не менее 12 мес.
2