ГОСТ ISO 16649-2—2015
3.2подсчетбета-глюкуронидаза-положительныхEscherichiacoli(enumerationof
(Hjlucuronidase-positive Escherichia coli): Определение количества колониеобразующих единиц (КОЕ)
бета-глюкуроиидаза-положительных Escherichia coli на кубический сантиметр или грамм образца, когда
испытание и вычисления проводятся в соответствии с настоящим стандартом.
4 Сущность метода
4.1 Заданное количество исследуемого образца или исходной суспензии засевают в две парал
лельные чашки Петри со средой с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ).
При таких же условиях каждое последующее десятичное разведение образца или исходной су
спензии засевают в две чашки Петри со средой ТВХ.
Чашки инкубируют в течение 18—24 ч при температуре (44 ± 1) °С. затем исследуют на наличие
колоний, типичных для бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli.
4.2 Рассчитывают количество КОЕ бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli на грамм
или кубический сантиметр образца (см. пункт 10).
5 Разбавитель и питательная среда
См. действующую лабораторную практику в ISO 7218.
5.1 Разбавитель
См. ISO 6887-1 или соответствующий стандарт, касающийся подлежащего исследованию продукта.
5.2 Питательная среда: среда с триптоном. солями желчных кислот и Х-глюкуронидом
(ТВХ)
5.2.1 Состав
Ферментативный гидролизат казеина
20.0 г
Сопи желчных кислот № 3
1.5 г
5-бром-4-хлор-3-индопил-бета-1>-глюкуроновая кислота (BCIG)
144 мкмольа>
Диметилсупьфоксид (DMSO)b|
3 см3
Агар
от 9 до 18 г с>
Вода
1000 см3
а’ Например. 0.075 г соли циклогексиламмония.
Ь|Диметилсульфоксид вреден при вдыхании и контакте. При работе с ним рекомендуется использовать
вытяжной шкаф. Ввиду токсичности можно использовать рекомендованный изготовителем разбавитель.
с>В зависимости от прочности агарового геля.
П р и м е ч а н и е — Используемые реактивы должны быть признанного аналитического качества и при
годными для микробиологических исследований.
5.2.2 Подготовка
Растворяют BCIG в диметилсульфоксиде или в рекомендованном изготовителем разбавителе.
Растворяют все компоненты в водо и нагревают до кипения.
При необходимости отрегулировать pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял
(7.2 ± 0.2) при температуре 25 °С.
Производят стерилизацию в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин. Сразу же охлаж
дают среду в водяной бане (6.3) при температуре от 44 °Сдо 47 °С.
6 Оборудование и стеклянная посуда
Обычное микробиологическое лабораторное оборудование (см. ISO 7218):
2