ГОСТ ISO 15141-2—2013
6.4 Разделение
Переносят 50 см1фильтрата в делительную воронку вместимостью 100 см3(см. 5.8). Добавляют
10 см3раствора бикарбоната натрия (см. 4.4) иосторожно взбалтывают. Дают фазам разделиться. Если
образуется эмульсия, центрифугируют в течение 2 мин при 2000 об/мин. Отбирают верхнюю
водную фазу для твердофазной экстракции.
6.5 Подготовка патрона
Подсоединяют патрон С,в(см. 5.11) к отверстиям вакуумного коллектора (см. 5.12) с коническими
колбами или химическими стаканами на 25 см3 внутри вакуумного коллектора для сбора растворителей
для обработки и промывки. Промывают каждый патрон дважды метанолом порциями по 2 см3(см. 4.7).
2 см3воды и 2 см3раствора бикарбоната натрия (см. 4.4).
П р и м е ч а н и е — В процессе работы не допускается высушивание колонки.
Для ускорения элюирования применяют слабое разрежение. Эта процедура также может осущест
вляться вручную путем применения давления от шприца (5-10) см3, прикрепленного наверху патрона.
Оставляют приблизительно 2 мм растворителя сверху фритты.
6.6 Экстракция колонкой
Пипеткой отбирают 5 см3бикарбонатный экстракт (см. 6.4) в колонку С18.
П р и м е ч а н и е — В процессе работы не допускается высушивание колонки.
Промывают 2 см3 раствора фосфорной кислоты (см. 4.2). а затем 2 см3воды. Удаляют промывные
жидкости.
Элюируют охратоксин А 8 см3раствора для элюирования (см. 4.11). Элюат собирают в пробирку
емкостью 10 см3(см. 5.13), в которой содержится 2 см3воды.
Перемешивают элюат стеклянной палочкой для смешивания двух фаз. Пипеткой отбирают экс
тракт охратоксина А (верхнюю фазу) в другую пробирку емкостью 10 см3с крышкой и резьбой (см. 5.13).
Дважды промывают оставшуюся фазу из первой пробирки 1 см3этилацетата (см. 4.5) и добавляют к
фазе охратоксина А во второй пробирке. Выпаривают досуха под током азота.
Сухой остаток сразу же растворяют в 500 мкл (VT) подвижной фазы (см. 4.12) и фильтруют через
микрофильтр с порами 0.45 мкм (см. 5.14) в пробирку емкостью 5 см3 с крышкой и резьбой (исследуемый
раствор образца).
Сохраняют оставшийся исследуемый раствор образца для подтверждения идентификации охра
токсина А путем образования метилового эфира (см. 6.11).
6.7 Условия ВЭЖХ анализа
Если использовались колонка в соответствии с 5.15.2 и подвижная фаза в соответствии с 4.12, то
рекомендуемыми являются нижеследующие параметры:
- скорость потока подвижной фазы..................................................................1 см3/мин;
- длина волны возбуждения флуоресценции.................................................. 333 нм:
- длина волны эмиссии....................................................................................... 460 нм:
- отрезающий фильтр.........................................................................................420 нм:
- объем дозирования (V,)........................................................................от 20 до 25 мкл
(использование не менее 50 мкл для заполнения 25 мкл петли).
6.8 Градуировочная кривая
Градуировочную кривую строят при первоначальном определении и при изменении хроматогра
фических условий.
Вводят не менее четырех градуировочных растворов различных концентраций (см. 4.19).
Строят график зависимости флуоресценции градуировочных растворов от массы охратоксина А.
выраженной в нг/мкл.
Прослеживают, чтобы проводился тест на линейность (9].
6.9 Идентификация
Определяют охратоксин А путем сравнения времени удерживания образца с временем удержива
ния стандартного вещества.
Иногда может потребоваться определение пика охратоксина А введением исследуемого раствора
и стандартного образца одновременно.
4