ГОСТ 33641-2015
7.4 Вода
В качестве испытуемой воды используют любую воду, соответствующую по своим химическим ха
рактеристикам приемлемой воде для разведения, как указано в приложениях А и В.
Л
юбая подходящая
вода, природная вода (поверхностная или грунтовая вода), восстановленная вода (см. приложение А)
или дехлорированная водопроводная вода является приемлемой в качестве воды для культивирования и
воды для испытания, если хирономиды будут выживать в ней во время культивирования и проведе ния
испытания без признаков стресса. В начале испытания значение pH испытуемой воды должно со
ставлять от 6 до 9. и общая жесткость должна быть не более 400 мг/л по СаСОэ. Однако если имеется
предположение о взаимодействии ионов жесткости с испытуемым веществом, то необходимо исполь
зовать воду с более низкой жесткостью (и таким образом, в данной ситуации не должна использоваться
среда Elendt Medium М4). Во время всего испытания используют одинаковый тип воды. Характеристики
качества воды, приведенные в приложении В. определяют не менее двух раз в год, или при наличии
подозрения, что данные характеристики могли существенно измениться.
7.5 Стоковые растворы — обогащенная вода
Испытуемые концентрации рассчитывают на основе концентраций в водной колонке, т. е. надо-
садочной воде. Испытуемые растворы с выбранной концентрацией обычно готовят разведением стоко
вого раствора. Стоковые растворы готовят растворением испытуемого вещества в испытуемой среде.
В некоторых случаях требуется использование растворителей или диспергирующих агентов для по
лучения соответствующего концентрированного стокового раствора. Примерами подходящих раство
рителей являются ацетон, этанол, метанол, моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир
этиленгликоля, диметилформамид и триэтиленгликоль. Используемыми диспергирующими агентами
могут быть Кремофор RH40, твин 80. 0.01 % метилцеллюлоза и НСО-40. Концентрация солюбилизи
рующего агента в конечной испытуемой среде должна быть минимальной (т. е. не более 0.1 млУл) и
одинаковой во всех испытаниях. Если используют солюбилизирующий агент, то он не должен оказывать
существенного влияния на выживаемость хирономид или проявлять видимое отрицательное воздей
ствие на личинок хирономид. что может быть установлено контролем на растворитель. Однако следует
избегать применения таких веществ.
7.6 Стоковые растворы — обогащенный осадок
Обогащенный осадок с выбранной концентрацией обычно готовят добавлением раствора испы
туемого вещества непосредственно к осадку. Стоковый раствор испытуемого вещества в деионизиро
ванной воде смешивают с искусственным осадком на роликовой мельнице, кормосмесителе или пере
мешиванием вручную. Если испытуемое вещество плохо растворяется в воде, то его можно растворить в
минимальном объеме подходящего органического растворителя (например, в гексане, ацетоне или
хлороформе). Затем данный раствор смешивают с 10 г мелкого кварцевого песка для каждого испы
туемого сосуда. Затем растворитель выпаривают до его полного удаления из песка: затем песок сме
шивают с соответствующим количеством осадка. Для солюбилизации, диспергирования или эмульги
рования испытуемого вещества используют только легколетучие растворители. Следует иметь в виду,
что количество песка, входящее в смесь испытуемого вещества и песка, необходимо учитывать при
приготовлении осадка (готовить осадок следует с меньшим количеством песка). Добавляемое испы
туемое вещество тщательно и равномерно распределяют в осадке. При необходимости анализируют
дополнительные пробы для определения степени однородности.
8 Дизайн испытания
Дизайн испытания связан с выбором количества и диапазона разнесения испытуемых концен
траций. количества сосудов для каждой концентрации и количества личинок на сосуд, количества кри
сталлизационных чашек и камер для культивирования. Ниже описаны дизайны для определения ЕСХ,
NOEC и диапазона предельных концентраций.
8.1 Дизайн для регрессионного анализа
8.1.1 Эффективная концентрация (ЕСХ) и диапазон концентраций, в котором действие испыту
емого вещества представляет интерес, должны охватывать концентрации, включенные в испытание,
так как конечная точка не экстраполируется за пределами полученных данных. Следует избегать
4