ГОСТ 33641-2015
белого (Trifolium repens), шпината (Spinacia oleracea) или другого растительного материала (CerophyI
или аотфа-целлюлоза). Добавление полного рациона из источника органического корма к осадку перед
обогащением не является ни тривиальным с точки зрения качества воды и биологической функции [21], ни
стандартизованным методом, но результаты недавно проведенных исследований показывают, что
данный метод работает [19], [26]. Взрослых комаров в камере для культивирования обычно не кормят,
но их плодовитость и фертильность повышаются, если используют ватную палочку, пропитанную на
сыщенным раствором сахарозы в качестве источника корма для вылупившихся взрослых особей [34].
9.1.7 Условия инкубации
9.1.7.1 Проводят легкое аэрирование надосадочной воды в испытуемых сосудах предпочтительно
в течение 24 ч после внесения личинок и продолжают в течение всего испытания (следует соблюдать
осторожность в отношении того, что концентрация растворенного кислорода не должна снижаться ме
нее 60 % ASV). Аэрацию проводят через стеклянную пастеровскую пипетку, зафиксированную на 2-3
см выше слоя осадка, обеспечивающую один или несколько пузырьковУсек. В случае испытания лету
чих химических веществ аэрацию системы осадок — вода не проводят, но в то же время
выполняют критерий достоверности не менее 60 % ASV (см. 6). Дополнительные рекомендации
приведены в [16].
9.1.7.2 Испытание с С. riparius проводят при постоянной температуре (20
±
2) °С. Для С. dilutus и
С. yoshimatuiрекомендуются температуры соответственно (23 ♦ 2) X и (25
±
2) °С. Используют 16-ча
совой световой период, и интенсивность света должна составлять от 500 до 1000 люкс. Для камер
для культивирования дополнительно увеличивают на 1ч светового периода и темноты.
9.1.8 Продолжительность воздействия
Дизайн с обогащением воды: период воздействия на 1-е поколение начинают, когда испытуемое
вещество вносят в надосадочную жидкость испытуемых сосудов (1 сут после добавления личинок —
возможные поправки к дизайну испытания см. в разделе 3 настоящего стандарта). Воздействие на
2-е поколение личинок начинают сразу же. поскольку они были внесены в уже обогащенную систему
осадок — вода. Максимальная продолжительность воздействия для 1-го поколения составляет 27 сут и
для 2-го поколения — 28 сут (1-е поколение личинок находится одни сутки в сосудах без воздействия)
для С. riparius и С. yoshimatui. Для С. dilutus максимальная продолжительность воздействия составляет
64 и65 сутсоответственно для 1-гои 2-го поколений. Общая продолжительность равна примерно 100 сут.
Дизайн с обогащенным осадком: воздействие начинается с внесения личинок и составляет не
более для обоих поколений С. riparius и С. yoshimatui28 сут и не более 65 сут для обоих поколений
С. dilutus.
9.2Наблюдения
9.2.1 Вылупление
9.2.1.1 Определяют время вылупления и общее количество полностью вылупившихся комаров
(самцов и самок). Самцов легко определить по их перистым усикам.
9.2.1.2 Испытуемые сосуды осматривают не менее трех раз в неделю для визуальной оценки
любого аномального поведения (например, выход из осадка, аномальное плавание) по сравнению с
контролем. В период предполагаемого вылупления. который начинается примерно через 12 сут после
внесения личинок С. riparius и С. yoshimatui (через 20 сут для С. dilutus). подсчитывают число вылу
пившихся комаров и определяют пол не менее 1 раза, но предпочтительно 2 раза в сутки (рано утром и
поздно вечером). После идентификации комаров 1-го поколения осторожно извлекают из сосудов и
переносят в камеру для культивирования. Комаров 2-го поколения удаляют и умерщвляют после
идентификации.
Л
юбые тяжи яиц. остающиеся до окончания испытания, в испытуемых сосудах 1-го по
коления собирают по отдельности и переносят не менее чем в 2.5 мл нативной воды в 12-луночные
микропланшеты (или другие подходящие сосуды), которые покрывают крышкой для предупреждения
значительного испарения. Регистрируют количество мертвых личинок и куколок, которые по визуаль
ным наблюдениям не подверглись вылуплению. Примеры камеры для культивирования, испытуемого
сосуда и аспиратора приведены в приложении Г.
9.2.2 Размножение
Влияние на размножение оценивают по числу тяжей яиц. отложенных 1-м поколением комаров, и
определяют фертильность этих тяжей яиц. Один раз в день собирают тяжи яиц из кристаллизационной
чашки, находящейся в каждой камере для культивирования. Собранные тяжи яиц переносят не менее
чем в 2,5 мл нативной воды в 12-луночный микропланшет (один тяж яиц в каждую лунку) или другие
подходящие сосуды, которые покрывают крышкой для предупреждения значительного испарения.
8