ГОСТ 33641-2015
Приложение А
(рекомендуемое)
Рекомендации по культивированию Chironomus riparius
А.1
Л
ичинки Chironomus культивируют в кристаллизационных чашках или более крупных контей
нерах. Мелкий кварцевый песок распределяют тонким слоем высотой примерно 5-10 см над дном кон
тейнера. Было показано, что кизельгур (например. Merck. Art 8117) является подходящим субстратом
(достаточным является более тонкий слой в несколько мм). Затем добавляют соответствующую требо
ваниям воду на высоту несколько см. Уровень воды пополняют при необходимости для восстановле ния
потерь в результате испарения и предупреждения высыхания. Воду заменяют при необходимости.
Проводят легкую аэрацию. Сосуды с культивируемыми личинками находятся в подходящей камере,
которая будет предупреждать вылет вылупившихся взрослых особей. Камера должна быть достаточно
большой, чтобы обеспечить роение вылупившихся взрослых особей, иначе не будет происходить копу
ляция (минимальный размер составляет примерно 30 * 30 * 30 см).
А.2 Камеры находятся при комнатнойтемпературе илиприпостоянной температуре окружающей сре
ды (20
±
2) °Ссо световым периодом 16 ч сеет (интенсивность примерно 1000 люкс). 8 ч темнота. Имеются
данные, что влажность воздуха менее 60 % относительной влажности может тормозить репродукцию.
Вода для разведения
А.З Используют любую соответствующую требованиям природную или искусственную воду.Обыч
но используют колодезную воду, дехлорированную водопроводную воду и искусственные среды (напри
мер, среда Elendt «М4» или «М7». см. ниже). Перед применением воду аэрируют. При необходимости
культуральную воду обновляют, осторожно сливая или откачивая использованную воду из сосудов для
культивирования, не нарушая трубочек личинок.
Кормление личинок
А.4
Л
ичинок Chironomus кормят хлопьевидным кормом для рыб (Tetra Min®. Tetra Phyll® или кор
мом для рыб другой аналогичной марки) из расчета примерно 250 мг на сосуд в сутки. Корм вносят в
виде сухого размельченного порошка или в виде суспензии в воде: 1.0 г хлопьевидного корма добавля
ют к 20 мл воды для разведения и перемешивают для получения однородной смеси. Такую суспензию
скармливают из расчета 5 мл на сосуд в сутки (перед использованием встряхивают).
Л
ичинки
более старшего возраста получают большее количество корма.
А.5 Кормление корректируют в зависимости от качества воды. Если культуральная среда стано
вится «мутной», то количество вносимого корма уменьшают. Добавление корма тщательно контроли
руют. Слишком малое количество корма будет вызывать переселение личинок по водной колонке, а
слишком большое количество корма будет вызывать повышенную микробиологическую активность и
снижение концентрации кислорода. Оба фактора могут приводить к пониженным скоростям роста.
А.6 При закладке новых сосудовдля культивирования также можно добавлять некоторые зеленые
водоросли (например. Scenedesmus subspicatus, Chlorella vulgaris).
Кормление вылупившихся взрослых особей
А.7 Некоторые экспериментаторы предложили использовать ватные палочки, пропитанные насы
щенным раствором сахарозы, служащие в качестве корма для вылупившихся взрослых особей.
Вылупление
А.8 При температуре (20
±
2) °С взрослые особи начинают вылупляться в сосудах с культивируе
мыми личинками примерно через 13-15 сут. Самцов легко отличить по перистым усикам.
Кладки яиц
А.9 После появления взрослых особей внутри камеры для культивирования все сосуды для куль
тивирования личинок тщательно осматривают три раза в неделю на отложение студенистых кладок
яиц. Если они присутствуют, то кладку яиц осторожно удаляют. Ее переносят в небольшую чашку, со
держащую пробу воды для культивирования. Кладку яиц используют для закладки нового сосуда для
культивирования (например. 2-4 кладки яиц/сосуд) или используют для испытания токсичности.
А. 10
Л
ичинки первой стадии развития вылупляются через 2-3 сут.
Закладка новых культуральных сосудов
А. 11 После получения культур закладывают новые сосудыдля культивирования личинок каждую не делю
или реже в зависимости от требований испытания, удаляя более старые сосуды после вылупления
13